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生物化學技術專題:微生物的糖發(fā)酵

2014-1-7  閱讀(1359)

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一、單糖發(fā)酵試驗

(一)、實驗原理

單糖發(fā)酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內,使其zui終濃度為 0.75~1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管,制成單糖發(fā)酵管,接種細菌經37℃培養(yǎng)18~24小時,若能分解糖產酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解 甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內則聚集有氣泡;不分解,則指示劑不變色。

(二)、實驗材料

1.菌種:大腸桿菌,傷寒桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2.培養(yǎng)基:葡萄糖發(fā)酵管,乳糖發(fā)酵管等。

(三)實驗方法

1.將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內。

2.置37℃孵箱培養(yǎng)18~24小時。

3. 觀察結果:由于一些細菌能分解某種糖類產酸,所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產酸者以“+”表示,如果同 時產生氣體,則培養(yǎng)基中小倒管內有氣泡出現,此乃產酸又產氣,以“⊕”表示,不分解,則指示劑不變色,用“-” 表示。

(四)、實驗結果

傷寒桿菌 大腸桿菌

葡萄糖 + ⊕

乳 糖 - ⊕

二、V-P(Voges-Proskauer)試驗

(一)、實驗原理

有些細菌如產氣桿菌,分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸脫羧,生成乙酰甲基甲醇,在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰,再與培養(yǎng)基內胍基結合,生成紅色化合物,V—P試驗陽性。

(二)、實驗材料

1.菌種:大腸桿菌,產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2.培養(yǎng)基:葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3.試劑:V-P試劑[40%氫氧化鉀水溶液(內含0.3%肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。

(三)實驗方法

1. 分別接種大腸桿菌,產氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中。

2. 置37℃培養(yǎng)48小時后,取出分別加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,搖勻,靜置試管架上5~15分鐘。

(四)、實驗結果

培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性,不變色為陰性。

三、甲基紅試驗

(一)、實驗原理

某 些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養(yǎng)基PH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應;若產酸 量少或產生的酸進一步轉化為醇、醛、氣體和水等,則培養(yǎng)基的酸堿度仍在PH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現黃色,為陰性反應。

(二)、實驗材料

1. 菌種:大腸桿菌,產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基:葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3. 試劑:甲基紅試劑。

(三)實驗方法

1. 分別將大腸桿菌,產氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2~3天取出,分別滴加甲基紅試劑2~3滴,混勻,觀察結果。

(四)、實驗結果

大腸桿菌:+,產氣桿菌:-。

四、枸櫞酸鹽利用試驗

(一)、實驗原理

枸 櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基,其中枸櫞酸鈉為*碳源,磷酸二氫銨為*氮源。一般細菌能利用磷酸二氫銨作為氮源,但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源。因 此,根據可否利用枸櫞酸鹽來鑒別細菌,如產氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源,細菌生長繁殖,形成菌苔,分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽,使培養(yǎng)基PH上升到7.0 以上,由綠色變?yōu)樯钐m色,為枸櫞酸鹽利用試驗陽性;而大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽,得不到碳源,不能生長,無菌苔形成,培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化,為枸櫞酸鹽 利用試驗陰性。

(二)、實驗材料

1. 菌種:大腸桿菌,產氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基:枸櫞酸鹽斜面。

(三)實驗方法

1. 分別將大腸桿菌,產氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基。

2. 置37℃恒溫培養(yǎng)24小時后觀察結果。

(四)、實驗結果

產氣桿菌:+(有菌苔生長,培養(yǎng)基變色)

大腸桿菌:-(無菌苔生長,培養(yǎng)基不變色)

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