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標簽： 大鼠 主動脈 內(nèi)皮細胞 細胞培養(yǎng)
大鼠血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)可以：（1）用于血液流動性、防止血栓形成、調(diào)節(jié)血管張力等研究；（2）用于選擇性通透性以及免疫調(diào)節(jié)等方面研究。
實驗方法
- 貼塊法
| 實驗方法原理 | 貼塊法適用于內(nèi)皮細胞產(chǎn)量低的、管徑較小血管的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，其方法較酶消化法簡便、經(jīng)濟。但缺點使易混有成纖維細胞和平滑肌細胞，前者的貼壁時間和內(nèi)皮接近，后者貼壁較內(nèi)皮慢，而且會被肝素所抑制。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 雄性Wistar大鼠 |
| 試劑、試劑盒 | DMEM 胎牛血清 內(nèi)皮細胞生長因子 肝素鈉 青鏈霉素 明膠 胰蛋白酶 PBS D-Hanks’液 |
| 儀器、耗材 | 手術(shù)器械 眼科剪 眼科鑷 培養(yǎng)皿 手術(shù)刀 培養(yǎng)瓶 CO2培養(yǎng)箱 |
| 實驗步驟 | 一、實驗方法
|
| 其他 | 一、實驗討論
植塊培養(yǎng)法適用于內(nèi)皮細胞產(chǎn)量低的、管徑較小血管的內(nèi)皮細胞培養(yǎng)，其方法較酶消化法簡便、經(jīng)濟。但缺點使易混有成纖維細胞和平滑肌細胞，前者的貼壁時間和內(nèi)皮接近，后者貼壁較內(nèi)皮慢，而且會被肝素所抑制。
而由于成纖維細胞生長較快，隨著傳代次數(shù)越多，其污染的程度越重，從而使培養(yǎng)失敗。因而，抑制和減少成纖維細胞是大鼠主動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)的關(guān)鍵問題。本法采用的方法是：
組織塊貼塊的時候，不可避免會有一些塊貼的方向不是內(nèi)膜面，那么zui后將爬不出內(nèi)皮，甚至長出較多雜質(zhì)細胞，需刮除。
另外，部分塊即使大小合適，方向也正確，也可能爬不出來，去除組織塊的時候，應(yīng)該以大局為重，看到內(nèi)皮細胞已經(jīng)爬出較多，而雜質(zhì)細胞也開始爬出的時候，就要果斷地去除組織塊了。72 h 只是個大概的時間，初學者不可以拘泥。 |
