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標(biāo)簽： 腫瘤 細(xì)胞 原代培養(yǎng)
腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）研究癌變機(jī)理；（2）研究抗癌藥檢測(cè)；（3）研究癌分子生物學(xué)；（4）用于闡明和解決癌癥。
詳細(xì)
實(shí)驗(yàn)方法
- 組織塊法
- 酶消化法
- 脫落細(xì)胞法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 腫瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)與正常細(xì)胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10%血清濃度即可，在原代培養(yǎng)時(shí)需加入原代細(xì)胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細(xì)胞生長(zhǎng)。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子如胰島素、松、雌激素等等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 瘤組織 |
| 試劑、試劑盒 | Hanks液 |
| 儀器、耗材 | 平皿 培養(yǎng)瓶 恒溫箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分。 |
| 其他 | 一、對(duì)腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株的評(píng)價(jià) 已建成的各種腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株，無疑都是可用的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。近年我國(guó)已建成的腫瘤細(xì)胞系已非常多，并獲得越來越廣泛的應(yīng)用。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗(yàn)，在使用這些細(xì)胞系時(shí)，應(yīng)持特別審慎態(tài)度，主要是應(yīng)考慮到這些細(xì)胞在長(zhǎng)期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能。*，長(zhǎng)期傳代細(xì)胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的。另外也可能發(fā)生如基因突變、基因易位或缺失等變化。其結(jié)果可能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)性狀上的變動(dòng)。 以近年建成的各種腫瘤細(xì)胞系為例，都已傳代少則幾十，多則百代以上后，才確認(rèn)建成了細(xì)胞系。這種情況下很難保證細(xì)胞從初代到建成時(shí)的性狀仍是一致的。已如前述，癌細(xì)胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去，凡已長(zhǎng)期傳代的細(xì)胞系，都已獲得不死性。當(dāng)前尚未*確證所有癌細(xì)胞都具有不死性；因此尚難肯定在長(zhǎng)期培養(yǎng)中的癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀與體內(nèi)時(shí)仍*相同（包括不死性）。據(jù)上述對(duì)用癌細(xì)胞系所獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)盡量做分析性的結(jié)論，避免做概括性的與體內(nèi)等同的結(jié)論，外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說，應(yīng)用各種較長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時(shí)，都應(yīng)如此。 根據(jù)人們的經(jīng)驗(yàn)，腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況： 1. *無細(xì)胞游出或移動(dòng)； 2. 有細(xì)胞移動(dòng)和游出，但無細(xì)胞增殖，細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代； 3. 有細(xì)胞增殖，傳若干代后停止生長(zhǎng)或衰退死亡； 4. 傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后，才又呈旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長(zhǎng)的腫瘤傳代細(xì)胞系。 以上現(xiàn)象說明腫瘤細(xì)胞對(duì)體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一些特殊的措施。 1. 適宜底物 把經(jīng)過純化的細(xì)胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細(xì)胞層等。 2. 生長(zhǎng)因子 應(yīng)用促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長(zhǎng)物，常用有胰島素、、雌激素以及其它生長(zhǎng)因子。 為提高腫瘤細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞（干細(xì)胞）的數(shù)量，可采用動(dòng)物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再?gòu)膭?dòng)物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動(dòng)物以裸鼠。 3、動(dòng)物體媒介培養(yǎng)方法 （1）瘤塊接種：取新鮮瘤組織，用 Hanks液洗凈血污，切成 1～3毫米小塊，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動(dòng)物腹部后，直接刺入皮下，注入瘤塊。 （2）飼養(yǎng)觀察，待腫瘤生長(zhǎng)達(dá)較大體積后，剝?nèi)〕隽鼋M織。 （3）進(jìn)行體外培養(yǎng)。 （4）為防止失敗，仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞培養(yǎng)易于成功。
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