聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
- 個(gè)性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
-
PCR技術(shù)專題：免疫PCR系列三-基本實(shí)驗(yàn)步驟
主要程序（1）抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復(fù)合物；（2）加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復(fù)合物；（3）加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4）PCR擴(kuò)增生物素化DNA部分。實(shí)驗(yàn)步驟（1）制備生物素化DNA將噬粒BLuescriptskt,用生物素標(biāo)記的M13引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增制備出含T3和T7引物序列的280bpDNa段，即為生物素化DNA。（2）免疫PCR模式1.試劑包被緩沖液：20mmol/LTris-HCI（pH9.5），含150mmol/LNaC -
PCR技術(shù)專題：PCR擴(kuò)增分離目的DNA段實(shí)驗(yàn)原理、材料和步驟
一、目的了解多聚合酶鏈反應(yīng)DNA擴(kuò)增技術(shù)的基本原理和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，掌握PCR反應(yīng)基本技術(shù)。二、原理PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是1986年由KallisMullis發(fā)現(xiàn)。這項(xiàng)技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分析，還可用于突變體和重組體的構(gòu)建，基因表達(dá)調(diào)控的研究，基因多態(tài)性的分析，遺傳病和傳染病診斷，腫瘤機(jī)制探查，法醫(yī)鑒定等方面。PCR技術(shù)已成為方法學(xué)上的一次革命，它必將大大推動(dòng)分子生物學(xué)各學(xué)科的研究發(fā)展。PCR是一種 -
PCR產(chǎn)物克隆大致分為兩類，即平頭連接和粘頭連接。平頭連接是將制備好的平頭載體和補(bǔ)平或削平的PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行連接。載體可用EcoRV或SmaI切成平頭；PCR產(chǎn)物純化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR產(chǎn)物也可不加處理。如果使用Stratagene公司的pfuDNA聚合酶或NewEnglandBiolabs公司的VentDNA聚合酶，這兩種酶有5’→3’校對(duì)能力，擴(kuò)增出來的PCR產(chǎn)物已經(jīng)是平頭，可以
-
PCR技術(shù)專題：反向PCR （inverse-PCR）實(shí)驗(yàn)步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側(cè)翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶，基本上就是目的片段?；静襟E如下：1、反向PCR（InversePCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點(diǎn)側(cè)翼DNA序列非常有效的方法。a.選擇合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。并在T-DNA的邊界（左邊界、右邊界均可）和酶切位點(diǎn)附近設(shè)計(jì)引物P1、P2；b.回收DNA，T4連接酶連接，使酶切后的DNA段環(huán)化；c.回收連接后的DNA，用引物P1、P2做PCR，就 -
菌落PCR標(biāo)簽：菌落PCR菌落PCR（ColonyPCR）可不必提取基因組DNA，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，省時(shí)少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進(jìn)行重組體的篩選或者DNA測(cè)序分析。zui后的PCR產(chǎn)物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)方法原理直接挑取菌落進(jìn)行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質(zhì)粒，成為PCR體系的模板，然后進(jìn)行鏈?zhǔn)綌U(kuò)增。實(shí)驗(yàn)材料基因樣品試劑、試劑盒dNTPPCR混合液儀器、耗材PC
-
巢式PCR標(biāo)簽：巢式PCR巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），使用兩對(duì)（而非一對(duì)）PCR引物擴(kuò)增完整的片段。*對(duì)PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似。第二對(duì)引物稱為巢式引物（因?yàn)樗麄冊(cè)?次PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在*次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于*次擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)方法原理由于巢式PCR反應(yīng)有兩次PCR擴(kuò)增，從而降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性（因?yàn)榕c兩套引物都互補(bǔ)的引物很少）增加了檢測(cè)的敏感性；又有兩對(duì)PCR引物與檢測(cè)模板的配對(duì)，增加了檢測(cè)的可靠性。由于第二套引
-
PCR技術(shù)專題：限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析
本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用RFLP分析技術(shù)檢測(cè)NMDA受體中的GRIN2A亞基基因3號(hào)內(nèi)含子中的2個(gè)SNP位點(diǎn)rs17750303（A→C）和rs837690（A→G）。[實(shí)驗(yàn)原理]DNA限制性內(nèi)切酶具有識(shí)別特定的DNA序列并在特定的部位切斷DNA雙鏈的活性功能，DNA分子由于突變（核苷酸的置換、插入或缺失）改變（或形成）了限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列，使DNA限制性內(nèi)切酶不能（或可以）將靶DN段切斷，電泳檢測(cè)時(shí)，存在相應(yīng)DNA限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列者原DNA片段變成短片段；不存在相應(yīng)DNA限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列者原DN -
PCR技術(shù)專題：PCR法檢測(cè)乙肝病毒（HBV）
PCR方法操作簡便，靈敏度高，可檢測(cè)出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應(yīng)用于多種病原微生物的檢測(cè)。乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，在我國發(fā)病率很高，而且HBV與肝硬化、原發(fā)性肝癌關(guān)系密切，因此，HBV的診斷極為重要。PCR檢測(cè)HBV-DNA敏感性明顯高于傳統(tǒng)的血清學(xué)方法，且能顯示HBV在體內(nèi)復(fù)制情況，直接反映患者血液的感染性，并對(duì)模棱兩可的或與臨床表現(xiàn)不符的血清學(xué)結(jié)果，PCR技術(shù)有助于明確診斷?！静牧稀看龣z血清、HBV-PCR反應(yīng)液20管（20μl/管）、HBV-DNA裂解液、陽性模
