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大型層析柱的特點(diǎn)及簡(jiǎn)介

閱讀:4855      發(fā)布時(shí)間:2017-5-17
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大型層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度,分離度與柱高的平方根相關(guān)。大型層析柱
  以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例
  中壓分離層析柱操縱方法
  以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例
  1 吸附劑的處理及柱子裝填
  將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個(gè)柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計(jì)量溶劑泵按丙酮一石油醚比例泵人溶劑,至溶劑流出止。
  2 上樣
  3 洗脫
  至洗脫*,相同流份合并,回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置,析出結(jié)晶,為冬凌草甲素。
  4 層析柱再生、平衡
  5 重結(jié)晶
  冬凌草甲素結(jié)晶析出*后,減壓過(guò)濾,然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保存,作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置,結(jié)晶再次析出,待結(jié)晶*后,抽濾,用少量乙醚洗滌,將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中,真空干燥至恒重。密封于瓶中,置干燥器中保存。
  6 薄層層析分析
  表明在該展開系統(tǒng)下,冬凌草甲素樣品和對(duì)照品都具有相同的RF值,并呈現(xiàn)出同樣的藍(lán)綠色斑點(diǎn),在制備的冬凌草甲素樣品中,沒(méi)有雜質(zhì)斑痕。大型層析柱

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