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可見分光光度計(jì)在使用過程中需要注意的一些問題
如何選用適合自己的可見分光光度計(jì)？一般我們主要從光學(xué)構(gòu)造、光譜范圍、帶寬、樣品類型和分析工具這五個(gè)方面來考慮?？梢姺止夤舛扔?jì)下面就按這五個(gè)方面簡單說明一下。
就是光學(xué)構(gòu)造。分光光度計(jì)從結(jié)構(gòu)上來區(qū)分一般可分為單光束和雙光束分光光度計(jì)。何為單光束分光光度計(jì)，顧名思義，單光束分光光度計(jì)主要是依賴單束光進(jìn)行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。 雙光束分光光度計(jì)一般是通過一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實(shí)際樣品，可以小化光漂移和減少測量時(shí)間。但是其中一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處。
其次就是光譜范圍。一般使用者考慮的是儀器需要比較大的靈活性，所以就得選擇更高性能的寬光譜儀器，紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。可見分光光度計(jì)一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。這些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光（780 nm 至3,000 nm）。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分（大約380 nm 到800 nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。
其次則是帶寬。可見分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。調(diào)整狹縫的寬度則可以選擇投射出實(shí)驗(yàn)要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。 為了測量吸光值，分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管。光電倍增管可以提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商更依賴于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。
還有就是樣品類型。在大部分的樣品類型中，分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對于小實(shí)驗(yàn)室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。 用小試管裝樣品容量一般從1μl-5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了很強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性。
后就是分析工具。大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。 另外一個(gè)值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的終使用。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都有各自感興趣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，也就有了不同的選擇。所以這也是需要考慮的一點(diǎn)。
下面要說的就是可見分光光度計(jì)在使用過程中需要注意的一些問題。
在分光光度計(jì)的使用過程中有這么幾點(diǎn)是需要注意的：
1）比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題。有些使用者對這個(gè)問題不夠重視，因操作不當(dāng)造成偶然誤差，嚴(yán)重影響分析結(jié)果。首先，應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜，就會使參比樣品與待測樣品的吸收光徑長度不一致，還可能使入射光不能全部通過樣品池，導(dǎo)致測試比準(zhǔn)確度不符合要求。其次，應(yīng)保證每次測試時(shí)，比色皿架推拉到位。若不到位，將影響到測試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度。后，還應(yīng)保證比色皿的清潔度，延長其使用壽命。
2）干燥劑的使用問題。干燥劑失效將導(dǎo)致a）數(shù)顯不穩(wěn)、無法調(diào)“0”點(diǎn)或“100%”點(diǎn)（電路或光電管受潮）。反射鏡發(fā)霉或沾污，影響光效率、雜散光增加。鑒于上述原因，分光光度計(jì)的放置地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤。
3）儀器的工作環(huán)境。應(yīng)避免陽光直射、避免強(qiáng)電場、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開腐蝕性氣體等。
4）比色皿不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學(xué)表面。
5）為了防止光電管疲勞，不測定時(shí)將試樣室蓋打開，使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。