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ELISA實驗操作對試劑盒本身的影響
閱讀:1635 發(fā)布時間:2019-2-22ELISA試劑盒在科研領(lǐng)域運(yùn)用尤為廣泛,它以其特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點被大家所親睞,今天與大家說說ELISA試劑盒測定的過程。
ELISA試劑盒測定過程:
固相包被→加待測樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加停止液→比色→斷定成果。
ELISA試劑盒操作較冗雜,在操作中應(yīng)留意以下4個方面:
1.在成批手藝檢測中,還應(yīng)留意操作時差的影響。加樣及混勻時刻的差異,使抗原抗體反響和酶促反響時刻不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不留意可能會導(dǎo)致過錯成果或定量禁絕。
2.洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決議試驗成敗的一個關(guān)鍵過程。意圖是除掉未結(jié)合的免疫反響物,停止抗原抗體反響,除掉標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)??捎孟窗鍣C(jī)洗板或手藝洗板,前者洗刷質(zhì)量較好,各反響孔洗刷作用均一,批內(nèi)、批間差異小,手藝洗板應(yīng)留意操控各孔洗刷作用,差異不宜太大。
3.跟著病況的發(fā)展或由其他要素影響,某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖,因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。直接法測定中,標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
4.加樣一般運(yùn)用加液器,在ELISA試劑盒中一般有4次加樣:加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加停止液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴,避免穿插污染。加酶結(jié)合物、底物和停止液時則不需更換吸嘴。
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