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技術(shù)文章

ELISA實驗:血清、血漿、尿液、唾液和細胞的收集和處理方法

閱讀:1634          發(fā)布時間:2019-10-21

    血清、血漿、尿液、唾液和細胞的收集和處理方法:
    1.血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

    2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

    3.尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    4.唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    1.培養(yǎng)的細胞
    A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎2s,冷卻30s的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    2.組織的細胞
    切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

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