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技術文章

上海滬鼎為您總結ELISA各個方法優(yōu)缺點

閱讀:1786          發(fā)布時間:2021-1-26

ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。

1.直接法(direct ELISA)
優(yōu)勢:操作手續(xù)簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。
缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。

2.間接法(indirect ELISA)
優(yōu)勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應性。
缺點:交互反應發(fā)生的機率較高。

3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
優(yōu)勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。
缺點:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。

4.競爭法(competitive ELISA)
優(yōu)勢:可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺點:整體的敏感性和專一性都較差。

5.新ELISA技術:
基于細胞法(cell-based ELISA):
優(yōu)勢:無需裂解細胞,所以目標蛋白損失少,可測定完整細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。
缺點:不能測定抗原量。

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