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技術(shù)分享:細(xì)胞培養(yǎng)中如何預(yù)防老化?
閱讀:902 發(fā)布時(shí)間:2021-2-4防止細(xì)胞老化主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種,特別是傳代,不能等細(xì)胞太密了之后傳,一般細(xì)胞建議長(zhǎng)到70%融合度傳代完好;換培養(yǎng)液應(yīng)該根據(jù)自己細(xì)胞消耗培養(yǎng)基的情況來(lái)確定是否該換。如果感覺時(shí)間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細(xì)胞,在不同的時(shí)間換液,后再來(lái)比較下,看什么時(shí)候換液好,得出自己的結(jié)論。
選擇正確的血清與培養(yǎng)基:細(xì)胞對(duì)血清特別敏感,直接影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。一定要選擇適合的血清不然就會(huì)因營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不協(xié)調(diào)而導(dǎo)致細(xì)胞老化;在間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)必然要進(jìn)行消化,但是消化對(duì)細(xì)胞的表面蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的破壞作用,因此不能長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行消化并且在選擇消化酶時(shí)也要選擇較為合適的pH和濃度,不然就會(huì)使細(xì)胞老化或者分化。雖然,老化細(xì)胞不會(huì)立即死亡,但其基因表達(dá)會(huì)發(fā)生變化,如果細(xì)胞老化現(xiàn)象嚴(yán)重,建議從種子庫(kù)或工作庫(kù)重新復(fù)蘇細(xì)胞。
在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),我們經(jīng)常會(huì)聽到一些專業(yè)名詞,原代培養(yǎng)是什么?什么是世代數(shù)?細(xì)胞系是什么?。根據(jù)老師們的反饋,我們總結(jié)了以下容易混淆的概念供大家參考~
1、原代培養(yǎng)(Primary culture)
開始于直接取自生物體的細(xì)胞、組織或器官的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。通常代表異質(zhì)細(xì)胞群,很難標(biāo)準(zhǔn)化和繁殖。它們的壽命一般有限,而且已知它們會(huì)隨著時(shí)間而改變其差異特征。
2、傳代(Passage(Subculture))
細(xì)胞從一個(gè)皿里轉(zhuǎn)移或傳代到另一皿里的過(guò)程稱為細(xì)胞傳代。這是一個(gè)操作行為,無(wú)法準(zhǔn)確定義細(xì)胞分裂次數(shù)。
3、傳代次數(shù)(Passage number)
一種細(xì)胞被傳代培養(yǎng)的次數(shù)稱為傳代次數(shù)。
4、世代數(shù)(Generation number)
一種細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱為世代數(shù)。
5、群體倍增時(shí)間(Population doubling time)
在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期細(xì)胞數(shù)量翻倍所需要的時(shí)間間隔稱為群體倍增時(shí)間。
6、群體倍增次數(shù)(Population doubling)
在培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞所經(jīng)歷的細(xì)胞數(shù)量倍增次數(shù)稱為群體倍增次數(shù)。
7、細(xì)胞系(Cell line)
原代細(xì)胞經(jīng)過(guò)第①次傳代后增殖的細(xì)胞稱為細(xì)胞系或亞克隆。隨著細(xì)胞的傳代,生長(zhǎng)能力強(qiáng)的細(xì)胞會(huì)占據(jù)優(yōu)勢(shì),終導(dǎo)致細(xì)胞群體在基因型和表現(xiàn)型上達(dá)到一定程度的均一性。
8、細(xì)胞株(Cell strain)
細(xì)胞系通過(guò)選擇或克隆獲得的具有特征的細(xì)胞系稱為細(xì)胞株。與親代細(xì)胞系起始時(shí)相比,細(xì)胞株往往會(huì)獲得其他一些遺傳學(xué)改變。