一、革蘭氏染色原理：

 

       通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的衡行外膜迅備拍速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不仿攔羨能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

 

二、革蘭氏染色步驟：

 

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法：

1）涂片固定。

 

2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。

 

3）自來水沖洗。

 

4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

 

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

 

6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。

 

7）蕃紅梁色液（稀）染2分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。

 

?    革蘭氏染色需用四種不同的溶液：堿性染料初染、媒染、脫色和復(fù)染。堿性染料初染液用于革蘭氏染色的初染液一般是結(jié)晶紫。媒染劑的作用是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或附著力，以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使其不易脫落，碘是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細(xì)胞進(jìn)行脫色，不同類型的細(xì)胞脫色反應(yīng)不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95%的酒精。復(fù)染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復(fù)染的目的是使被脫色的細(xì)胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細(xì)胞仍然保持初染的顏色，從而將細(xì)胞區(qū)分成G+和G-兩大類群，常用的復(fù)染液是番紅。

 

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