一、實(shí)驗(yàn)概述?

腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA實(shí)驗(yàn)是一種常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，用于檢測(cè)生物樣本（如血清、血漿等）中TNF-α的濃度。該實(shí)驗(yàn)基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理，通過(guò)雙抗體夾心法實(shí)現(xiàn)TNF-α的特異性檢測(cè)。

二、實(shí)驗(yàn)步驟?

準(zhǔn)備工作?

 獲取TNF-α ELISA試劑盒，確保試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)且保存條件符合要求。

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需器材，包括酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱、蒸餾水或去離子水等。

 

?包被孔板?

 如使用未包被好的孔板，需自行用TNF-α抗體進(jìn)行包被。

將包被好的孔板置于4℃冰箱中孵育過(guò)夜（16-18小時(shí)），以確保抗體充分結(jié)合。

 

?洗板?

 包被完成后，使用洗板機(jī)洗板4次，以去除未結(jié)合的抗體。

 

?加入封閉液?

 向孔板中加入封閉液，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。

 

?加樣與孵育?

 向孔板中加入待測(cè)樣本或標(biāo)準(zhǔn)品，然后加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體。

將孔板置于37℃恒溫箱中孵育一定時(shí)間，使抗原與抗體充分結(jié)合。

 

?再次洗板?

 孵育完成后，再次使用洗板機(jī)洗板，以去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。

 

?顯色與測(cè)定?

 向孔板中加入顯色底物（如TMB），在HRP的催化下顯色。

顯色完成后，加入終止液終止反應(yīng)。

使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。

 

?結(jié)果計(jì)算?

 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

根據(jù)待測(cè)樣本的OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找對(duì)應(yīng)的TNF-α濃度。

 

三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)?

 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需嚴(yán)格控制操作時(shí)間和溫度，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

使用高質(zhì)量的試劑和器材，避免非特異性結(jié)合和污染。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果需進(jìn)行質(zhì)量控制，如設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)的有效性。

 

四、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用?

 TNF-α ELISA實(shí)驗(yàn)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中具有廣泛應(yīng)用，可用于評(píng)估TNF-α在疾病發(fā)生和發(fā)展中的作用，以及評(píng)估藥物治療效果等。但需注意，該實(shí)驗(yàn)僅供科研使用，嚴(yán)禁用于臨床診斷?

  

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