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軟瓊脂實驗步驟新篇章
閱讀：3469 發(fā)布時間：2013-3-21軟瓊脂（soft agar）實驗一般用來檢測細胞的集落形成能力?，F(xiàn)在這種方法越來越多的用于分離癌細胞，也可以用來確認癌細胞是否具有癌化特性，為進一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎(chǔ)。該方法看似簡單，但如果細節(jié)掌握不好，往往導(dǎo)致實驗失敗或數(shù)據(jù)缺乏說服力。如果你曾經(jīng)在這個實驗上栽了跟頭，請不妨在如下幾個方面進行嘗試：
1.要確保在整個實驗過程中所使用的瓊脂處于*液體狀態(tài)（>80℃），尤其是在做基底時，如果瓊脂凝固過快會導(dǎo)致基底不均一；
2. 做瓊脂基底是應(yīng)避免產(chǎn)生小氣泡，一旦有小氣泡產(chǎn)生，應(yīng)該立即將氣泡趕走；
3. 應(yīng)使用2倍濃度的培養(yǎng)基，并加入20%FBS 和2%的P/S；
4. 在制備上層時，混合液體需要有順序，一般為在同一個移液管中先吸取液態(tài)瓊脂，再吸取同體積的2倍濃度的培養(yǎng)基，zui后在吸取2倍體積的細胞懸液，這樣既可以保證瓊脂不立即固化，又可以有效避免細胞因溫度過高而燙死；
5. 因為該實驗周期較長，為避免過度蒸發(fā)而導(dǎo)致瓊脂裂解，需要保證小環(huán)境持久濕潤，一般可在六孔板或培養(yǎng)皿下面墊上三到四層濕潤的薄紙。
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