ELISA試劑盒,豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒

中文名稱：豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA原理
操作步驟：具體請(qǐng)參照說(shuō)明書
技術(shù)服務(wù)：從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過(guò)程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)
科研用途: 科研ELISA檢測(cè)試劑盒

一、“豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒”實(shí)驗(yàn)原理：

    ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

二、ELISA常用的幾種方法：
1、雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫*種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物; 
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體); 
加底物。底物的降解量＝抗原量。
2、直接法測(cè)定抗原 
將抗原吸附在載體表面；
加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；
加底物。底物的降解量＝抗原量。 
3、間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
加酶標(biāo)抗體；
加底物。 測(cè)定底物的降解量＝抗體量。

三、“豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒”操作注意事項(xiàng)：

1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對(duì)照或者空白；預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

四、elisa試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：

1.產(chǎn)品有哪幾種規(guī)格？可檢測(cè)多少個(gè)樣本？ 
產(chǎn)品分為48T和96T兩種規(guī)格。 每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線一般設(shè)7個(gè)不同濃度，加上空白孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線一共需要8個(gè)孔。因此，一個(gè)48T試劑盒zui多可以測(cè)定40個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完），一個(gè)96T試劑盒zui多可以測(cè)定88個(gè)樣本（不做重復(fù)且一次用完）?？梢愿鶕?jù)實(shí)際樣本數(shù)量和實(shí)驗(yàn)計(jì)劃選擇合適的產(chǎn)品規(guī)格。  
2.48T和96T的試劑盒有哪些不同？ 
48T和96T的試劑盒，每個(gè)孔的反應(yīng)體系都是*一樣的。不同的是試劑盒中各組分的規(guī)格，詳見(jiàn)說(shuō)明書。  
3.產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？ 
產(chǎn)品在研發(fā)前期已通過(guò)嚴(yán)格的穩(wěn)定測(cè)試，發(fā)貨前亦須通過(guò)檢測(cè)并提供質(zhì)檢報(bào)告，在市場(chǎng)上深受廣大客戶的贊許！ 

五、洗板方法：

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、操作步驟：

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

七、結(jié)果判斷：

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣

八、“豬肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)ELISA試劑盒”試劑盒性能：

1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2.  靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明：

1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。