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技術(shù)文章

動物細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測

閱讀:1126          發(fā)布時間:2016-6-30

主要用途

        我公司動物細(xì)胞衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑是一種旨在使用化學(xué)方法,快速有效地裂解動物細(xì)胞,通過高速離心,獲得澄清細(xì)胞裂解懸液,在β-半乳糖苷酶反應(yīng)體系里,以氯苯胺紅 -β-D- 吡喃半乳糖苷為棕黃色底物,水解所產(chǎn)生的暗紅色的氯苯胺紅,即采用比色法定量測定細(xì)胞裂解懸液制備樣品中的低表達(dá)β-半乳糖苷酶活性,藉此評價作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來探測衰老狀況的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物細(xì)胞裂解懸液等樣品衰老細(xì)胞內(nèi)源性半乳糖苷酶活性分析。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,參數(shù)優(yōu)化,操作簡便、高度敏感。

注意事項

  • 本產(chǎn)品為20次(比色皿)和80次(96孔板)操作
  • 本產(chǎn)品的各項參數(shù)達(dá)到優(yōu)化
  • 建議操作時,注意避光
  • 操作時,須戴手套
  • 反應(yīng)液(Reagent D)嚴(yán)格避免光照和反復(fù)凍融
  • 用戶可以根據(jù)需求按比例調(diào)整試劑用量進(jìn)行樣品制備
  • 用戶可以測定細(xì)胞裂解懸液的蛋白濃度,便于計算活性單位之需;建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量檢測試劑盒(30030.1)
  • 如果用戶需要測定背景空對照,可以*按照活性檢測的操作步驟進(jìn)行,*變化在于100微升樣品改成100微升裂解液(Reagent B)替代
  • 如果用戶測得背景空對照,計算活性時,勿忘(樣品吸光讀數(shù)-背景空對照讀數(shù))
  • 反應(yīng)孵育時間的理想范圍為10分鐘至30分鐘內(nèi)出現(xiàn)暗紅色顯色:低于5分鐘表明酶活性過高,建議稀釋樣品,否則影響檢測精度
  • 如果樣品的酶活性過低,可以增加孵育時間至72小時
  • 樣品的酶活性吸光值在0.1至1.2 OD單位為理想狀態(tài),其酶活性與吸光值成線性正相關(guān);吸光值在0.3至0.9 OD單位為狀態(tài)
  • 反應(yīng)終止后,即刻進(jìn)行比色測定
  • 比色測定后,比色皿須清洗*
  • 酶活性單位濃度定義:在37℃溫度下,pH6.0的條件下,每單位酶在單位時間內(nèi)(每分鐘)水解1微摩爾的氯苯胺紅 -β-D- 吡喃半乳糖苷
  • 本公司提供系列β-半乳糖苷酶檢測試劑產(chǎn)品
  • 如:
  •    動物組織衰老特異性β-半乳糖苷酶活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒

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