實(shí)現(xiàn)常規(guī)熒光共聚焦成像和快速光譜成像的*結(jié)合

隨著科研人員需求的不斷增加，探測(cè)到更多的信號(hào)甚至是光譜信息變得越來(lái)越必要，尤其在區(qū)分顏色比較接近的熒光的時(shí)候。創(chuàng)新的A1si激光共聚焦顯微鏡帶給用戶的靈活性，高速度以及光譜功能，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出常規(guī)共聚焦顯微鏡。配備的常規(guī)熒光探測(cè)器和光譜探測(cè)器，可以滿足多種科研領(lǐng)域的應(yīng)用需求。

單次掃描即可獲得320nm帶寬的光譜圖像

波長(zhǎng)分辨率可以是2.5, 5,和 10 nm. 選用10 nm分辨率時(shí), 單次掃描可獲得的波長(zhǎng)范圍高達(dá)320 nm，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出其他類似系統(tǒng)。

1） 簡(jiǎn)單，靈活的顯微鏡控制

只需單擊一個(gè)圖標(biāo)，即可實(shí)現(xiàn)目鏡觀察和共聚焦拍攝之間的光路切換。通過(guò)A1si的系統(tǒng)軟件，用戶可以輕松控制顯微鏡的各個(gè)部件，將更多的時(shí)間用于拍攝圖像。

2） 透射光拍攝

在拍攝光譜圖像和標(biāo)準(zhǔn)共聚焦圖像的同時(shí)，A1si還可以拍攝包括DIC，明視場(chǎng)，相差在內(nèi)的透射光圖像，以便在組織和細(xì)胞中更好的進(jìn)行熒光標(biāo)記的定位。

3） FRAP觀察

通過(guò)macro程序，可以進(jìn)行FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching光漂白后的熒光恢復(fù)) 實(shí)驗(yàn). 激光精確定位到用戶的任意區(qū)域（圓形，矩形，任意多邊形，點(diǎn)，線，甚至環(huán)形）進(jìn)行光漂白。其他FRAP技術(shù)，包括iFRAP (interval FRAP) 和FLIP (Fluorescence loss in Photobleaching)同樣得到支持。

4） 對(duì)光譜圖像進(jìn)行時(shí)間動(dòng)態(tài)記錄

由于單次拍攝即可得到全光譜圖像，所以A1si可以對(duì)光譜圖像進(jìn)行動(dòng)態(tài)拍攝。拍攝時(shí)間序列的模式有：zui快模式/固定時(shí)間間隔模式/用戶自定義拍攝時(shí)間表模式）

5） 對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行光譜拆分，消除串色

A1si 軟件可以將不同熒光探針的信號(hào)清楚地拆分開，包括光譜接近，大范圍重疊的熒光信號(hào)（比如CFP, RFP, YFP,和 Alexa488）. 在觀察多重?zé)晒馊旧珌?lái)定位蛋白分子， FRET 實(shí)驗(yàn)時(shí)，這個(gè)功能非常有用.通過(guò)光譜拆分，還可以清除掉自發(fā)熒光信號(hào)。

6） 高效率的熒光透過(guò)技術(shù)

熒光光纖和探測(cè)器表面都使用了高效防反射涂層，將熒光信號(hào)的損失降到zui低，實(shí)現(xiàn)光路的高透過(guò)率。

7） 高波長(zhǎng)分辨率

通過(guò)使用精密設(shè)計(jì)的衍射光柵，可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)2.5nm的光譜分辨率.此外還有5nm 和 10nm分辨率可選。不同的分辨率可以分別用來(lái)拆分光譜重疊的探針或同時(shí)對(duì)4個(gè)或更多的探針進(jìn)行拍攝。

8） 采用偏光控制技術(shù)的光譜探測(cè)器

Nikon的DEES (Diffraction Efficiency Enhancement System衍射效率增強(qiáng)系統(tǒng)) 技術(shù)可以對(duì)偏振光進(jìn)行控制，從而實(shí)現(xiàn)亮度的zui大化。通過(guò)調(diào)整偏振光方向，衍射光柵的效率得到*化，從而在從藍(lán)到紅的整個(gè)可見光范圍內(nèi)提高廣譜數(shù)據(jù)的亮度和線性。

9） 拍攝到真實(shí)的熒光顏色

由于采用了新的精確矯正技術(shù)，而且光譜分辨率和針孔大小無(wú)關(guān)，A1si可以精確探測(cè)到光譜信號(hào)，得到真實(shí)顏色。同其他的偽彩色系統(tǒng)相比，A1si可以實(shí)時(shí)觀察到真彩色的樣本。

用 A1si得到的廣譜數(shù)據(jù)和探針制造商提供的數(shù)據(jù)非常接近。

10） 把對(duì)活細(xì)胞和組織的影響降到zui低

通過(guò)單次激發(fā)就可以得到全光譜圖像，因此激光強(qiáng)度和PMT增益的調(diào)節(jié)變得簡(jiǎn)單而快速。同時(shí)把熒光信號(hào)的衰減以及激光對(duì)標(biāo)本的損傷降到zui低。對(duì)于活細(xì)胞和組織，A1si是一套“溫柔”的系統(tǒng)。

11） 同時(shí)拍攝32通道的光譜圖像

A1si 采用了32 通道PMT，并革新了多重高速數(shù)字轉(zhuǎn)換電路和LVDS(Low Voltage Differential Signal低壓差分信號(hào))高速串行傳輸技術(shù),創(chuàng)造性地實(shí)現(xiàn)了單詞掃描得到32通道光譜信息，大大減少了拍攝時(shí)間，并實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)觀察。

12） 雙積分信號(hào)處理

新開發(fā)的DISP (Dual Integration Signal Processing雙積分信號(hào)處理) 技術(shù)提高了電子效率，避免了模/數(shù)轉(zhuǎn)換過(guò)程中熒光信號(hào)的損失。整個(gè)曝光期間，熒光信號(hào)得到全程記錄，有效提高了信噪比。