Streptavidin (SAV) MagBeads 鏈霉親和素（SAV）免疫磁珠

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

鏈親和素(streptavidin)是一種來源于阿維丁鏈霉菌由四個(gè)相同亞基組成的結(jié)合蛋白質(zhì)，每個(gè)亞基均有一個(gè)與有高親和力的結(jié)合位點(diǎn)。生物學(xué)上常將鏈霉親和素包被在磁珠上，借鏈霉親和素-高親和力結(jié)合特性，結(jié)合素化蛋白，多肽，及非蛋白質(zhì)（如各種 DNA、RNA 分子）等分子，進(jìn)而從混合體系中快速分離化成分，進(jìn)行如親和純化，細(xì)胞分離，DNA 探針分析和 mRNA 分離等多方面應(yīng)用。

本品streptavidin 磁珠可配合實(shí)驗(yàn)需要選擇標(biāo)記的各種單抗去分離細(xì)胞，應(yīng)用范圍廣泛，使用靈活。其原理是在實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中加入標(biāo)記的單抗，磁珠通過 streptavidin 與標(biāo)記的單抗結(jié)合后，單抗與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原特異性結(jié)合而使細(xì)胞被磁珠間接捕獲，從而達(dá)到純化分離細(xì)胞的目的。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存。

注意事項(xiàng)

1）免疫磁珠易沉降聚集，因此產(chǎn)品使用前要?jiǎng)×艺袷幓虺曁幚怼?/span>

2）Fc 受體（FcR）封閉：在某些實(shí)驗(yàn)中，部分抗體會(huì)通過其Fc段與不同細(xì)胞表面的FcR 結(jié)合，出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。此時(shí)可預(yù)先將細(xì)胞與IgG 或針對(duì)FcR的特異性抗體室溫孵育5-10min，一般10⁷細(xì)胞中可加入1-10μg IgG或FcR 的特異性抗體進(jìn)行封閉。

3）如果分選的細(xì)胞進(jìn)一步用作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，所有步驟都需在無菌環(huán)境及條件下進(jìn)行。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法（細(xì)胞分選操作流程）

由于不同抗體的親和力，欲分離細(xì)胞在混合體系中所占比例以及細(xì)胞表面靶抗原密度的差異，操作流程中所提供的相關(guān)參數(shù)不一定適用于所有的細(xì)胞分選實(shí)驗(yàn)。因此實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì) 化抗體使用濃度，磁珠與細(xì)胞反應(yīng)比例，及反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行滴定，優(yōu)化以達(dá)到*的細(xì)胞分選效果。

1. 分離單細(xì)胞：使用淋巴細(xì)胞分離液從抗凝血中提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），或者從淋巴組織中制備單細(xì)胞懸液。PBMC用含5%BSA，0.09%NaN₃的PBS，pH7.4 洗3次，40-70μm尼龍網(wǎng)過濾去除細(xì)胞團(tuán)塊和碎片后調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2-3×10⁷/ml。

【注】：反應(yīng)體系中加入5-10%蛋白可降低非特異性反應(yīng)，但蛋白濃度太高會(huì)降低分選效率。

2. 向PBMC 中加入適量化抗體，一般1×10⁷ PBMC 中加入0.5-10μg 抗體，室溫反應(yīng)30min。

3. 1000rpm離心5min，棄上清中未結(jié)合的化抗體。加入1ml磁珠分選緩沖液重懸細(xì)胞，1000rpm 離心5min，棄上清，洗2次。

4. 1ml磁珠分選緩沖液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞與50μl 免疫磁珠混合，室溫反應(yīng)30min，間隔10min輕輕晃動(dòng)反應(yīng)管，避免磁珠沉淀，使磁珠與細(xì)胞充分反應(yīng)，盡量防止出現(xiàn)氣泡。之后進(jìn)入后續(xù)細(xì)胞分選。

5. 細(xì)胞分選 (Negative Selection)

5.1 陰性分選

① 磁分器分離5-8min，收集未被免疫磁珠結(jié)合的細(xì)胞懸液至另一干凈管中。

② 加入1ml磁珠分選緩沖液重懸磁珠，用玻璃滴管或移液槍槍頭反復(fù)吹打磁珠。

③ 重復(fù)步驟①，合并兩次收集的細(xì)胞懸液，可將細(xì)胞懸液再置磁分離器分離 5-8min，可明顯增加靶細(xì)胞純度。

5.2 陽性分選 (Positive Selection)

① 磁分離器分離5-8min，去除未與磁珠結(jié)合的細(xì)胞。

② 結(jié)合了靶細(xì)胞的免疫磁珠用1ml 磁珠分選緩沖液洗5次（5×1ml）后，可直接進(jìn)行流式檢測(cè)，或者37℃培養(yǎng)48h可使細(xì)胞與磁珠分離。

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