產(chǎn)品信息
 

產(chǎn)品描述
 

增強(qiáng)型ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。其原理是，蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以一抗及HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合膜上的目的蛋白，或以HRP標(biāo)記的探針直接或間接結(jié)合膜上的核酸。洗膜后用本產(chǎn)品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數(shù)分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉(zhuǎn)入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數(shù)秒到數(shù)小時(shí)，顯影定影后蛋白質(zhì)或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒采用了*的發(fā)光底物系統(tǒng)，降低曝光背景的同時(shí)引入新型的氧化劑，大大提高試劑盒的穩(wěn)定性，使其在室溫能穩(wěn)定放置一年。除用于X光片，還可直接使用熒光CCD掃描，主要用于WB檢測(cè)以及化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)系統(tǒng)。

產(chǎn)品組分
 

運(yùn)輸與保存方法
 

常溫運(yùn)輸。

頻繁使用可置于室溫保存，一年穩(wěn)定；長期不用，建議置于4 ºC保存延長效期。【注】：A液（36222-A）需避光保存！

操作方法（以X光膠片為例）

1. 執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或者HRP標(biāo)記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發(fā)光液是HRP的顯色底物，因此檢測(cè)系統(tǒng)終必須基于HRP酶標(biāo)記抗體或者核酸探針。

2. 后1次洗膜的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液（推薦100-200 μL發(fā)光液/cm²膜）：分別取等體積的A液和B液，混勻備用。

【注】：取A液和B液一定要用不同的槍頭；另建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜*干燥。用移液器將工作液加到膜上，使之充分接觸。室溫孵育1-2 min，準(zhǔn)備立即壓片曝光。

4. 用平頭鑷子夾起膜，膜的下緣輕輕接觸吸水紙，去除膜上多余的液體，留下少量工作液，不可讓膜*干燥。

5. 在X光膠片暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。

6. 暗房內(nèi)取一張X光膠片至于包裹的膜上，壓片，曝光30 sec-2 min，顯影定影沖洗?！咀ⅰ浚浩毓鈺r(shí)間需根據(jù)曝光強(qiáng)度做相應(yīng)的調(diào)整。若是背景過高，可使用兩張X光膠片同時(shí)壓片。

其他曝光方法

如果使用CCD拍照：可以將膜放置于工作液中，開機(jī)后按照使用說明，將膜取出，進(jìn)行拍照。另外，也可以根據(jù)情況，調(diào)整機(jī)器測(cè)量參數(shù)，提高信噪比。

注意事項(xiàng)
 

1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育都需要避免氣泡，另外戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

3）長時(shí)間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

4）某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。

5）避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

6）使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

7）使用生物素-親和素系統(tǒng)，避免使用牛奶封閉，可能會(huì)導(dǎo)致背景過高。

8）金屬氧化物顆粒可能會(huì)造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn)，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

9）（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標(biāo)記探針或者抗體應(yīng)避免使用NaN₃，如必需使用勿超過0.01%。
10）本品無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

問題與解決方案
 

相關(guān)產(chǎn)品
 

HB181130