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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級(jí)會(huì)員·12年
Hieff CanaceHigh-Fidelity DNA Polymerase高保真酶
| 參考價(jià): | ￥ 626 |
| 訂貨量: | 1 件 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- Hieff Canace 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：854更新時(shí)間：2023-02-23 14:01:58
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存 | 價(jià)格 |
Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase高保真酶 | 10135ES60 | 100 U | -20oC | 626.00 |
10135ES76 | 500 U | -20oC | 2356.00 | |
10135ES80 | 1000 U | -20oC | 4256.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經(jīng)基因工程改造而成。其蛋白結(jié)構(gòu)包含5’→3’聚合酶結(jié)構(gòu)域和經(jīng)過改造的3’→5’外切酶結(jié)構(gòu)域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達(dá)到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了*的延伸因子，擴(kuò)增速度達(dá)到15 sec/kb。本產(chǎn)品配備了優(yōu)化后的酶緩沖液，添加了PCR增強(qiáng)組分，使得該酶具有*的擴(kuò)增效率和廣泛的模板適應(yīng)性，非常適合復(fù)雜模板的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分 | 產(chǎn)品編碼/規(guī)格 | ||
10135ES60 （100 U） | 10135ES76 （500 U） | 10135ES80 （1000 U） | ||
10135-A | Hieff Canace High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μl） | 50 μl | 50 μl×5 | 50 μl×10 |
10135-B | 2×Canace buffer (with 3 mM MgCl2) | 1 ml×3 | 1 ml×15 | 1 ml×30 |
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克??；復(fù)雜模板擴(kuò)增或長片段擴(kuò)增；高通量PCR。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃, 30 min內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位（U）。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：20 μl反應(yīng)體系，10 U本品和1 μg λDNA -HindIII，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：20 μl反應(yīng)體系，10 U本品和1 μg λDNA，37℃溫育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μl體系中，加入2 U本品，以無菌ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA 基因。30個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴(kuò)增條帶。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20oC保存。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μl | - |
2×Canace buffer (with 3 mM MgCl2) | 25 μl | 1× |
DNA模板 | 適量 | |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μl | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μl | 0.5 μM |
Hieff CanaceTM High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μl) | 0.5 μl | 1 U/50 μl |
【注】：1) 試劑使用：使用前要充分融化混勻。
2) 聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μl?？梢栽?.5-2 U/50 μl之間進(jìn)行優(yōu)化，請(qǐng)勿超過2 U/50 μl。
3) 聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在zui后一步加到反應(yīng)體系中。
4) Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5) 復(fù)雜模板：復(fù)雜模板和高GC模板的擴(kuò)增，可在體系中加3 %的DMSO，另外也可按2%的濃度遞增優(yōu)化。
6) 不同模板的推薦使用量（50 μl反應(yīng)體系）：
模板種類 | 擴(kuò)增片段1 kb-20 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質(zhì)?；虿《綝NA | 1ng-20 ng |
cDNA | 1-5 μl (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序設(shè)置
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 98℃ | 0.5-3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 15-30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：1) 預(yù)變性溫度和時(shí)間：推薦使用98℃。預(yù)變性推薦時(shí)間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2) 退火溫度和時(shí)間：推薦使用60℃。退火溫度過低會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物設(shè)計(jì)參考熒光定量引物標(biāo)準(zhǔn)。推薦退火時(shí)間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時(shí)間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的zui適溫度和時(shí)間。
3) 延伸溫度和時(shí)間：推薦使用72℃。延伸時(shí)間推薦如下：質(zhì)粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為30 sec/kb，根據(jù)實(shí)際情況可延長至40 sec/kb。
4) 擴(kuò)增產(chǎn)物：請(qǐng)將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，產(chǎn)物直接用于克隆，請(qǐng)使用平末端連接載體。
應(yīng)用實(shí)例
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