產(chǎn)品描述

ssDNA Assay Kit 是一種簡便、靈敏、精確的單鏈 DNA（ssDNA)熒光定量檢測試劑盒，在 1~200 ng 區(qū)間具有良好的線性關(guān)系。本試劑盒包含熒光檢測試劑、緩沖液及相關(guān)的 ssDNA 標(biāo)準(zhǔn)品，使用前先將熒光檢測試劑用緩沖液稀釋成工作液，然后加入待測 ssDNA 樣品，即可使用熒光酶標(biāo)儀或 Qubit熒光儀進(jìn)行讀數(shù)。試劑盒對單鏈 DNA 的選擇度并不高于雙鏈DNA，但它對常規(guī)的污染物如蛋白質(zhì)、鹽類物質(zhì)、洗滌劑等具有較好的耐受性。

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸和保存

冰袋運(yùn)輸，2-8℃避光保存，有效期1年，請注意避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1. 特別注意：ssDNA Reagent在2-8℃儲存條件下為結(jié)冰狀態(tài)，使用時(shí)提前放置室溫解凍，務(wù)必確認(rèn)溶解，充分混勻后再使用；若有沉淀物，可將該試劑至于 37℃水浴鍋中溫育， 并輕柔混勻直到沉淀物溶解；

2. 試劑盒對單鏈 DNA 的選擇度并不高于雙鏈DNA，待檢樣品應(yīng)避免雙鏈DNA污染；

3. 檢測試劑ssDNA Buffer略起泡，使用時(shí)輕柔震蕩或顛倒混勻，避免劇烈震蕩；

4. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅；

5. 對于檢測試劑和ssDNA標(biāo)準(zhǔn)品，每次使用前輕柔震蕩或上下顛倒數(shù)次后瞬時(shí)離心數(shù)秒（請勿渦旋振蕩）；

6. 為保證定量結(jié)果的精確，請使用校準(zhǔn)后的移液器操作，樣品濃度較低時(shí)請?jiān)龃蟠郎y樣品投入體積；

7. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

8. 本產(chǎn)品僅用作科研用途！

實(shí)驗(yàn)步驟

使用Qubit熒光儀進(jìn)行ssDNA定量檢測分析

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

2. 使用前，將試劑盒中的各組分恢復(fù)至室溫（室溫放置約半小時(shí)），檢查ssDNA Reagent（組分A）是否有沉淀，若有沉淀物，可將該試劑至于37℃水浴鍋中溫育，并輕柔混勻直至沉淀物溶解；

3. 準(zhǔn)備足夠量0.5 mL PCR薄壁管并標(biāo)注。請勿在PCR管側(cè)壁標(biāo)注，以免影響熒光信號采集。推薦使用本公司Qubit專用檢測管（貨號83509ES）

4. 配制檢測工作液在避光塑料容器中，使用ssDNA Buffer按比例將適量ssDNA Reagent稀釋至1×（例：取1 μL ssDNA Reagent，加入199 μL ssDNA Buffer），上下顛倒混勻。工作液現(xiàn)用現(xiàn)配，每次配制檢測工作液時(shí)要使用潔凈的容器；

5. 配制待檢樣品

6. 配制待檢標(biāo)準(zhǔn)品1和標(biāo)準(zhǔn)品2：取190 μL檢測工作液至標(biāo)準(zhǔn)品PCR管中，分別加入10 μL ssDNA Standard 1和ssDNA Standard 2至相應(yīng)標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品PCR管中，輕柔渦旋振蕩2-3 sec，盡量避免氣泡產(chǎn)生，瞬時(shí)離心數(shù)秒；

7. 配制待檢樣品：取180-199 μL檢測工作液至樣本PCR管中，分別加入20-1 μL待檢樣本，使PCR管中每個(gè)樣本終體積為200 μL，輕輕渦旋振蕩2-3 sec，盡量避免氣泡產(chǎn)生；

4. 檢測

1. 將所有待檢PCR管置于室溫避光孵育2 min；瞬離收集管壁上液體。

2. 按照Qubit熒光儀的操作說明，選擇ssDNA檢測程序，使用待檢標(biāo)準(zhǔn)品校正熒光曲線后進(jìn)行待檢樣品的濃度測定。

附表1

污染物對ssDNA定量檢測試劑盒檢測結(jié)果的影響

HB230412