使用Vivacon 500 去除PCR反應(yīng)之后的引物

PCR （聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） 是在分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用非常廣泛的一種試驗(yàn)方法，例如用于克隆片段準(zhǔn)備、擴(kuò)增DNA序列，法醫(yī)認(rèn)證分析。這些應(yīng)用可能或多或少地對(duì)PCR反應(yīng)組分比較敏感。PCR反應(yīng)組分含有多種鹽、自由核苷酸片段，甘油，蛋白、引物。特定的限制酶以及DNA連接酶對(duì)這些污染物比較敏感，因此，許多下游應(yīng)用需要進(jìn)行PCR產(chǎn)物清洗。

這篇應(yīng)用文檔里，我們顯示使用Vivacon500超濾離心管可有效去除引物片段，30 kDa Hydrosart膜可以有效保留300 bp DNA的片段同時(shí)去除25 bp引物。

材料方法

PCR樣品由100μg/ml 300 bp PCR 片段和2μM 25 bp引物溶于E緩沖液, pH 8.0, 50μl PCR 樣品和450 μl TE緩沖液被分別加樣到 4個(gè)Vivacon 500超濾離心管，然后5,000g離心15分鐘，然后再加入 450μl TE 緩沖液, pH 8 ，再次5,000g離心15分鐘再次離心條件為2,500g 20 s.隨后對(duì)引物去除情況進(jìn)行12% TBE-Polyacrylamide SDS膠的電泳分析5μl原始樣品, *次離心產(chǎn)物，沖洗后離心產(chǎn)物，每個(gè)樣均做二次重復(fù)。

結(jié)果

SDS電顯示泳膠結(jié)果30 kDa Vivacon500超濾管可以有效去除引物，30分鐘實(shí)驗(yàn)過(guò)程后300 bp PCR 片段可以有效回收，單次離心后 80%引物被去除，第二次離心后95%引物被去除。

使用30 kDa Vivacon500可以有效去除引物及PCR 反應(yīng)組分，使300 bp 及以上DNA的片段PCR樣品適用于后續(xù)應(yīng)用。

12% TBE-Polyacrylamid SDS膠30 kDa Vivacon®500

Lane 1 300 bp DNA  + 25 bp 引物 – 原始樣品

Lane 2 300 bp DNA  + 25 bp 引物 – *次離心產(chǎn)物 （1）

Lane 3 300 bp DNA  + 25 bp 引物 – *次離心產(chǎn)物 （2）

Lane 4 300 bp DNA  + 25 bp 引物 – 沖洗后離心產(chǎn)物 （1）

Lane 5 300 bp DNA  + 25 bp 引物 – 沖洗后離心產(chǎn)物 （2）