上海信帆：如何配制合適的buffer？

      生物系統(tǒng)對pH的變化非常敏感，PH的變化可能改變或甚至終止正在進行的實驗。 因此，配制有效的保持實驗pH穩(wěn)定的緩沖液對實驗的成功至關(guān)重要。

建立一個良好的緩沖體系，主要要考慮以下標準：

1. pKa

大多數(shù)生物反應(yīng)發(fā)生在PH 6-8之間，因此理想的緩沖液需要具有在該范圍內(nèi)的pKa值，以提供zui大緩沖能力。 大多數(shù)緩沖液在20℃，1個pKa單位內(nèi)的pH下能地工作。 如果你認為你的實驗會降低反應(yīng)的pH值，那么選擇一個pKa值略低于工作pH值的緩沖液。 同樣，如果您希望實驗提高您的工作pH，請選擇pKa略高的緩沖液。

2. 溶解性

緩沖液應(yīng)非常易溶于水，在非極性溶劑（脂肪，油和有機溶劑）中極少溶解。 這防止緩沖液積累在細胞膜，囊泡和其他非極性區(qū)室中。

3. 膜不滲透性

緩沖液不應(yīng)該容易地通過細胞膜 ，這可以減少緩沖液在亞細胞結(jié)構(gòu)中不成比例的累積。

4. zui小鹽效應(yīng)

鹽雖可以調(diào)節(jié)化合物的緩沖能力，但高離子緩沖液可引起生物系統(tǒng)的問題或其它反應(yīng)。 如：在鈣依賴的反應(yīng)中應(yīng)該避免檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液（Tris也能螯合鈣）。

5. 對解離的影響

緩沖液濃度、溫度和離子強度應(yīng)當對緩沖液的解離具有zui小的影響。

6. 離子強度

確保你的緩沖液對你的實驗環(huán)境的離子濃度沒有太大的影響，正常生理離子強度為：100-200mM的KCl或NaCl。 一些緩沖液，如磷酸鹽，可以顯著影響溶液中離子的濃度。

7. 陽離子相互作用

如果緩沖液和陽離子配體形成復合物，該復合物應(yīng)是可溶的。 理想情況是，至少一些緩沖化合物不會形成復合物。

8. 穩(wěn)定性

緩沖液應(yīng)當是化學穩(wěn)定的，抵抗酶促和非酶促降解

9. 生化惰性

緩沖液不應(yīng)影響或參與任何生化反應(yīng)。

10. 光吸收

緩沖劑不應(yīng)吸收波長在230nm和700nm之間的可見光或紫外光。 這防止了對分光光度測定的干擾。

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