葡聚糖凝膠使用說明，葡聚糖凝膠現(xiàn)貨供應(yīng)

葡聚糖凝膠使用說明，葡聚糖凝膠現(xiàn)貨供應(yīng)

葡聚糖凝膠使用說明

葡聚糖凝膠（Sephadex）是白色珠狀顆粒，由葡聚糖經(jīng)醚鍵相互交聯(lián)聚合而成具有多孔性三度空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子分離材料，為穩(wěn)定的親水性凝膠，在水中和電解質(zhì)中很容易溶脹。不同型號(hào)的葡聚糖用英文字母 G 表示，如 G-25，G-75 等，G 后面的數(shù)字除以 10 為該凝膠每克干重所吸收水的毫升數(shù)。能使一定分子范圍的大分子進(jìn)入凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)。溶脹程度不同，分離分級范圍也不同。具體產(chǎn)品的分離范圍及應(yīng)用如下：

產(chǎn)品性質(zhì)

化學(xué)穩(wěn)定性：葡聚糖那不溶于一切溶劑（除非它被水解），在水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和

弱酸性溶液中都有很好的穩(wěn)定性，在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑容易

破壞凝膠，所以應(yīng)該避免使用。在濕空氣中易長霉，可用氯、甲苯、疊氮鈉做防腐劑。

物理穩(wěn)定性：葡聚糖凝膠并不熔融，可以在濕態(tài)、中性 pH 進(jìn)行滅菌或者高壓滅菌 120°C，

30 分鐘不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至 120°C 以上開始焦糖化。

產(chǎn)品用途

利用分子篩作用，主要用于除鹽、多肽分離、清洗生物提取液，分子量的測定。

使用方法

1.凝膠預(yù)溶脹

在凝膠使用前，首先將其溶脹，具體方法：室溫下，將干粉浸泡在超純水中充分溶脹 24 小

時(shí)，并不斷攪拌保證凝膠 充分溶脹；或者在室溫下，將干粉浸泡在 50-60%乙醇中至少 24

小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠*溶脹，用超純水洗去乙醇；

2.裝柱

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性注入柱內(nèi)，注意要避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或者斷層，保持濕態(tài)裝柱，可在凝膠可承受的操作壓下裝柱，保證裝柱均勻，裝完柱可以檢測柱效，檢查凝膠裝填是否合格。

3.平衡

上樣前用平衡液平衡層析柱至少 3-5 個(gè)柱體積直到基線平穩(wěn)；

4.上樣

凝膠過濾的上樣量一般為 5%的柱床體積，初次上樣建議控制在 1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到 20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在 40-50cm 以下，過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為 5：1 即可

5.洗脫方法

可以用無鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱 Buffer 中加入 NaCl 等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；

6.在位清洗（CIP）

凝膠使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以 40cm/h

用 1M 氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

7.保存

凝膠使用完后，可將其回收，可將凝膠用超純水沖洗干凈并濾干，加入 0.02%的疊氮鈉做為防腐劑，或者浸泡在 20%的乙醇中，防止長菌。