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油紅O染色液實驗流程及注意事項!

時間:2022/1/14閱讀:4885
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油紅O染色液實驗流程及注意事項!

脂質(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有機溶劑(如乙醇、乙MI等)。人體的脂肪主要有兩種:1、儲存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、腎、胰腺等部位;2、結構脂肪,如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等),主要分布于細胞內。中性脂肪(Neutralfat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,呈中性。中性脂肪染色經常采用蘇丹II、蘇丹III、蘇丹IV、蘇丹黑B、油紅O法等,傳統(tǒng)方法采用蘇丹染料,最近發(fā)現偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色,油紅O是很強的脂溶劑和染脂劑,較易與甘油三脂結合呈小脂滴狀,與磷脂結合力稍差,其染色原理一般認為是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。

油紅O染色液(培養(yǎng)細胞專用)主要用于顯示人工培養(yǎng)細胞的脂肪變性和類脂質的異常沉著,細胞內出現多數中性脂肪滴,鑒別培養(yǎng)細胞中所發(fā)生的變化及其性質,標本不采用含有乙醇的固定液,脂肪的陽性染色結果呈橘黃至紅色,但具體顏色因脂質濃度而定。

產品名稱:油紅O染色液(細胞專用)

產品規(guī)格:4×20ml

儲存條件:4℃

有效期:12個月

用途:專門用于脂肪/脂滴染色

產品組成

名稱

4×20ml

4×50ml

Storage

試劑(A): ORO Fixative

20 ml

50 ml

RT 避光

試劑(B): ORO Stain

B1: ORO Stain A

12 ml

30 ml

4℃  避光

B2: ORO Stain B

8 ml

20 ml

RT

按B1:B2=3:2比例混合靜置10min, 即為ORO Stain,不宜提前配制;配好后,若有沉淀, 過濾之后再使用。

試劑(C): Mayer蘇木素染色液

20ml

50 ml

4℃  避光

試劑(D): ORO Buffer

20ml

50 ml

RT

自備材料:

60%異丙醇、蒸餾水

實驗步驟(僅供參考):

一、培養(yǎng)細胞

1、 移除細胞培養(yǎng)基,用PBS洗兩次,加ORO Fixative固定液固定20-30min。

2、 棄去固定液,用蒸餾水洗2次。

3、 加入60%異丙醇浸洗5min。

4、 棄去60%異丙醇后加入新配制好的ORO Stain,浸染10-20min。


5、 棄去染色液,水洗2-5次,直到無多余染液。

6、 加入Mayer蘇木素染色液,復染核1-2min。棄去染液后水洗2-5次。

7、 入ORO Buffer 1min,棄去。

8、 加入蒸餾水覆蓋細胞并在顯微鏡下觀察。

二、細胞涂片

1、 制備新鮮骨髓、血液涂片,入ORO Fixative固定10~15min。

2、 取出涂片,放于流通的空氣中10~15min。

3、 入新配制好的ORO Stain,浸染15min。

4、 入60%異丙醇漂洗20~30s,流水沖洗,入蒸餾水稍微清洗。

5、 入Mayer蘇木素染色液,復染核2min。

6、 入ORO Buffer 1min。

染色結果:

中性脂肪

橙紅色或橘紅色

磷脂

粉紅色

細胞核

藍色

注意事項:

1、 ORO染色液不夠穩(wěn)定,易產生沉淀,不宜提前配制。

2、 Mayer 蘇木素染色液復染時間不能過長。

3、 染色結果不能長期保存,應盡快觀察及照相。

4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5、本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!


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