Q-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法

Q-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法

Q-瓊脂糖凝膠FF是一種將三甲胺基烷基季銨基鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的帶有強(qiáng)堿陰離子基團(tuán)的層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有離子交換容量高，非特異性吸附少，流速快等特點(diǎn)，廣泛用于蛋白質(zhì)、核酸、多肽及多糖等的生物大分子實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備和生物制藥、生物工程的工業(yè)化制備。

使用方法：

　　1. 裝柱

　　1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

　　1.2 將凝膠抽干，并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇，用初始緩沖液（按凝膠:緩沖液=3:1的比例）配成勻漿并脫氣。

　　1.3 將層析柱垂直固定，底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。

　　1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。

　　1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭，打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5個(gè)柱體積，再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5個(gè)柱體積，調(diào)節(jié)適配柱頭，使其盡量貼近膠面，最后用2 ~ 3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

　注意：

1)所有操作過(guò)程不能引入氣泡，保證裝膠的均勻度。

2)如無(wú)條件做1.2，填料層有氣泡，可進(jìn)行2次裝柱，去除保存的乙醇和氣泡。

3)乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。

　　2. 平衡

　　將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。

　　3. 上樣

　　切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣，上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇，也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量；樣品的預(yù)處理：除鹽，置換緩沖液，澄清過(guò)濾（0.45、0.22 μm）等。

　　4. 沖洗

　　用2 ~ 3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱，觀察檢測(cè)器的變化，直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變，此時(shí)未交換的組分被清洗出去。

　　5. 洗脫

　　離子交換柱的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫，一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進(jìn)行。

　　6. 再生

　　用高鹽濃度的緩沖液（含1 ~ 2mol/L NaCl）按操作流速?zèng)_洗3 ~ 5個(gè)柱體積，接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個(gè)柱體積。

　　若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

　　7. 在位清洗(CIP)

　　對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)，可采用以下流程進(jìn)行在位清洗：1 mol/L NaOH洗2個(gè)柱體積，8 mol/L尿素洗2個(gè)柱體積， 30%異丙醇洗2個(gè)柱體積，平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。

　　在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì)，反向效果更佳。如需要去除內(nèi)毒素?zé)嵩?，可以?0 cm/h速度下，1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2h，再用無(wú)熱原的1 M NaCl溶液置換(OH-置換為Cl-)。

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