堿性磷酸酶顯色試劑盒檢測(cè)原理
產(chǎn)品描述：
本試劑盒應(yīng)用于胚胎干細(xì)胞（ES）和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞（iPS）的鑒定，以及免疫組化、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內(nèi)的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽（BCIP）/硝基四氮唑藍(lán)（NBT）是堿性磷酸酶（AP）的常用底物之一，BCIP在AP的催化下會(huì)被水解生成強(qiáng)反應(yīng)性產(chǎn)物，后者與硝基四氮唑藍(lán)（NBT）反應(yīng)生成不溶性產(chǎn)物，使之呈現(xiàn)深藍(lán)色至藍(lán)紫色。
操作指南:
1. AP顯色工作液的配制：
取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應(yīng)緩沖液，充分混合均勻，再加入30μl 100×BCIP溶液，配置成工作液，如需改變工作液體積，可按相同比例適量配制。1h內(nèi)使用。
2. 顯色步驟:
a) 檢測(cè)細(xì)胞的內(nèi)源性堿性磷酸酶：吸出培養(yǎng)基，PBS潤(rùn)洗3次，加入4％多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入顯色工作液，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，用PBS潤(rùn)洗1次，然后保存于PBS溶液中，顯微鏡下觀察結(jié)果。
b) 檢測(cè)組織切片或膜上結(jié)合的堿性磷酸酶抗體：使用洗滌液洗滌完后，加入適量工作液，保證
完-全覆蓋樣品表面，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，去除工作液，用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應(yīng)。
注意事項(xiàng)：
工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好的工作液在一定時(shí)間內(nèi)有效。
使用NBT時(shí)請(qǐng)采取必要的防護(hù)措施。
工作液用量必需充足，保證覆蓋組織片或印跡膜。
為獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化如樣品使用量、抗體稀釋度、孵育時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件。
綜上所述，BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒是一種功能強(qiáng)大、應(yīng)用廣泛的科研工具，能夠幫助科研工作者準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)和分析堿性磷酸酶的活性。
