上海信帆生物：關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問(wèn)題

Q：western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?

A：脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封閉膜，避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。

Q：請(qǐng)問(wèn)封閉液和抗體稀釋液用BSA和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?

有人跟我說(shuō)奶粉的封閉效果更好些，但是通常只能用于WesterBlot，如果要做elisa或者phage display時(shí)候，蛋白鋪板的話，不能使用脫脂奶粉。可是也有人說(shuō)可以，請(qǐng)問(wèn)是否有這個(gè)說(shuō)法呢?

A：所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子，一般是脫脂奶粉或BSA.對(duì)WesterBlot來(lái)說(shuō)兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠(yuǎn)較BSA復(fù)雜，如果要做ELISA或者phage display時(shí)候，我們還是用BSA,有關(guān)的操作手冊(cè)上也是如此。 我推測(cè)也沒(méi)有依據(jù)說(shuō)脫脂奶粉就不能用，注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質(zhì)量不同， 脂質(zhì)是會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，即使是用于WesterBlot也要有所挑選， 有興趣可以試試，但是不要在正式實(shí)驗(yàn)時(shí)試。

Q：請(qǐng)問(wèn)大家，封閉的時(shí)候，為什么一定要用脫脂奶粉?

A：膜上有蛋白缺損點(diǎn)，不用蛋白封蛋白缺損點(diǎn)容易出現(xiàn)非特異染色。

也可用BSA封，效果并不比脫脂奶粉好。

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