上海信帆生物：有絲分裂（Feulgen染色法）

實驗原理：細胞中的DNA受1NHC1，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤堿很快*被除掉，使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態(tài)。水解后，組織要經水洗再移至希夫（Schiff）試劑中，希夫試劑即同露出來的醛基發(fā)生反應，呈現(xiàn)紫紅色。這個反應是Feulgen在1942年提出來的，是DNA的一個特異性檢查法。 
水解的時間很重要，因為核酸的水解有兩個過程，*，漂呤堿很快被除掉，脫氧核糖中潛在的醛基顯露出來，第二，組蛋白和核酸愈來愈多地被除掉。在短時間的水解作用以后，*個過程占優(yōu)勢，這時候用希夫試劑染色，染色體的染色作用zui強。隨著水解作用的繼續(xù)進行，第二個過程逐漸變成優(yōu)勢，因此水解液中的希夫反應增強，而染色體中的希夫應減弱。zui后，第二個過程超過*過程時，染色體也隨之停止反應。 
希夫試劑是堿性品紅———亞硫酸溶液，呈無色。與DNA醛基反應后，使堿性品紅恢復原來的紅色。 
二、實驗目的：觀察蠶豆根尖細胞或其它根尖細胞內染色體中的DNA，以及染色體在有絲分裂中的行為，掌握Feulgen染色方法。 
三、實驗材料：上次實驗制成了石蠟切片。 
四、實驗準備： 
1．用具 立式染色缸一套，鑷子，蓋玻片，小漏斗，鐵架，毛邊紙，玻璃棒，顯微鏡，恒溫水浴鍋，溫度計，燒杯，棕色瓶，黑紙。 
2．玻璃器皿的清洗 主要是染色缸的清洗，一般用肥皂粉洗，用水沖凈即可，如不能洗凈時，要用洗液浸泡后，再沖洗，自來水洗后，再用少量蒸餾水過洗一次。盛放100%酒精、二甲苯的染色缸必須干燥，缸蓋內緣必須涂以幾士林，以防止蒸發(fā)和收水分，影響濃度。染色缸上要貼上標簽。 
3．實驗所需藥口及配制 
濃鹽酸（36—38%），堿性品紅，偏重亞硫酸鈉（Na2S2O5）; 
亞硫酸鈉（Na2SO3）,固綠（fast green），加拿大中性樹膠乙醇（30—100%），二甲苯。 
藥品配制： 
1各種濃度的乙醇配制.
21NHCI配制：取濃HCI 82.5毫升加蒸餾水至1000毫升，搖勻。 
3Sciff 試劑的配制 
0．5克堿性品紅，加到已經煮沸的100毫升蒸餾水中，再煮沸3—4分鐘，待溶液冷卻到50℃時過濾，再等溶液冷到25℃以下時，加入10毫升的1NHCI和1。5克偏重亞硫酸鈉，裝在棕色瓶中，塞緊瓶子，用黑紙包好，放在暗處，第二天觀察，溶液還是淡紅色就不能用，只得重配。 
偏重亞硫酸鈉與1NHCI反應，放出SO2，SO2與堿性品紅反應，生成堿性品紅--亞硫酸溶液，呈無色。 
4漂染液的配制 
先配10%的亞硫酸鈉溶液。 
把10%亞硫酸鈉溶液10毫升加200毫升蒸餾水，再加10毫升1NHCI，即成漂當液。 
5固綠染色液 
0.5克固綠溶于100毫升95%乙醇溶液。 
五、實驗步驟：
水解 先在恒溫水浴箱中準備好恒溫60℃的1NHCI。注意一定要控制好溫度不能過高，高了醛基要破壞，低了小解不充分，醛基不能釋放出來。水解的時間長短要根據(jù)材料，以及固定液的種類而定。根據(jù)試驗結果，取一個適當時間。

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