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明膠酶譜試劑盒操作注意事項(xiàng)

時(shí)間：2017-6-13閱讀：657
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明膠酶譜試劑盒操作注意事項(xiàng)！

1.制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6，復(fù)性的TRITON時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)有絮狀物，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中，因?yàn)闀?huì)改變孵育液的PH值，在普通孵箱即可。

6.細(xì)胞樣本用PBS 5倍體積震蕩裂解,估算細(xì)胞的體積，然后加入5倍體積的PBS，渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心.或者手動(dòng)震蕩。

7.組織或者細(xì)胞的話可以用PBS，也可以用低滲溶液如三分之一或者四分之一的生理鹽水按照5倍體積加入后震蕩裂解細(xì)胞，離心即可，步驟和提蛋白很相似即可,其實(shí)重點(diǎn)的步驟主要是采用低滲裂解液進(jìn)行裂解，組織的話可以勻漿20-30次，然后10000轉(zhuǎn)左右離心，5分鐘取上清即可。

 

 

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