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361次蛋白實驗中的常見問題
1、蛋白樣品不能反復凍融;
2、蛋白樣品應加蛋白酶抑制劑,以增加蛋白的穩(wěn)定性;
3、細胞水平要做 Western Blot,一般地 5×106 個細胞提取的蛋白夠就足 Western Blot;
4、如果目標蛋白是膜蛋白和胞漿蛋白,所用的去垢劑就要溫和得多,建議提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性;
5、若轉膜不*,可以加大上樣量,還有轉移時你可以用降低電流延長時間,轉膜液中甲醇的比例多加 5-10%;
6、如果上樣量超載,可以濃縮樣品,也可以根據你的目標分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地,超載 30%是不會有問題的。如果已經超了不少了,而且小分子量的也要,可以考慮加大膠的厚度,可以試試 1.5mm 的 comb;
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