神經(jīng)肽 Y 放免藥盒操作說(shuō)明書(shū)

神經(jīng)肽 Y(Neuropetide NPY)是一種含有 36 個(gè)氨基酸殘基的多肽。廣泛分布于哺乳動(dòng)物的中
樞神經(jīng)系統(tǒng)。NPY 可收縮血管，升高血壓，對(duì)心臟表現(xiàn)為負(fù)性肌力作用。近有作者證實(shí)血小
板有合成 NPY 的能力。NPY 含量與應(yīng)激反應(yīng)程度有關(guān)，當(dāng)出血性休克時(shí)，NPY 釋放增加對(duì)維
持全身血壓穩(wěn)定和調(diào)節(jié)器官血流量具有重要的代償作用。研究各種病理狀態(tài)血漿及血小板 NPY
含量與釋放的改變及其病理生理意義，對(duì)心腦血管疾病的防治具有廣闊的研究前景。
測(cè)定盒組成：
1、緩沖液一瓶。
2、分離劑（第二抗體）一瓶。
3、NPY 抗體一瓶，用前加 ml 緩沖液稀釋。
4、NPY 標(biāo)記一瓶，用前加 ml 緩沖液稀釋。
5、NPY 標(biāo)準(zhǔn)品五瓶：用前每瓶加 ml 緩沖液稀釋 33、100、300、600、1200pg/ml。
6、抑肽酶一瓶。
7、10%EDTA.Na2 一瓶。
樣品收集：
1、取靜脈血 3ml 注入含 10%EDTA.Na2 40ul 和抑肽酶 10ul（含 100U/ml 以上）的試管中，
混勻 4℃，3000 轉(zhuǎn)/分 離心 10 分鐘，分離血漿（溶血樣品影響測(cè)定結(jié)果）。如需要可分裝 2-3
份保存，放-20℃可保存 2 個(gè)月，在-70℃以下可存放半年。 測(cè)定前，使樣本置于室溫或冷水中
復(fù)融，再次 4℃，3000 轉(zhuǎn)/分 離心 5 分鐘，取上清測(cè)定。
2、組織樣品的處理：取出活組織，吸去血跡，稱重，放入 0.2mol/L 1N HAC 1ml 中，然后
在 100℃水浴中煮沸 10 分鐘，勻漿。4℃，3000 轉(zhuǎn)/分 離心 15 分鐘，取上清放-20℃以下保存，
測(cè)定時(shí)用 PBS 五倍以上稀釋，以調(diào)節(jié) PH 值。另外，每種組織的樣品非特異結(jié)合（U 0 ）可能有
差異，每份標(biāo)本單獨(dú)做一個(gè) U 0 。取組織的重量視不同組織而異。
3、血漿樣品處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：有少數(shù)患者可能由于使用某些藥物或個(gè)體差異，出現(xiàn)血漿
蛋白對(duì)抗原抗體反應(yīng)的影響，測(cè)定 NPY 值偏低，甚至為零。為排除樣品中蛋白質(zhì)的干擾，可采
用簡(jiǎn)易酸性乙醇提取法，
具體步驟如下：
取血漿 0.5ml+1ml 酸性無(wú)水乙醇（ 100ml 無(wú)水乙醇+冰乙酸 1.2ml），放振蕩器上振蕩 1min，4℃，
3500rpm/15min 離心 15min，將上清液倒入青霉素瓶，在 45℃水浴鍋上蒸干（可將水浴鍋溫
度調(diào)到 80℃左右，鍋口上放一鋁板，鋁板上溫度約 40~45℃，將青霉素瓶置于鋁板之上），大
約需 24 小時(shí)樣品可以*干燥，干燥后將青霉素瓶加蓋，封口，放-20℃保存。
測(cè)定前，每瓶加 PH7.4 PBS 0.5ml 溶解，混勻，倒入塑料管中，放-20℃ 4h 以上至樣品*
凍結(jié)，然后取出放置 4℃*溶解，取上清 200ul 測(cè)定用。
注：從 4℃取出后，一定要輕拿輕放，千萬(wàn)不要再振蕩混勻，不要在室溫放置過(guò)久，zuihao現(xiàn)加現(xiàn)
取。