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240次神經(jīng)肽 Y(Neuropetide NPY)是一種含有 36 個氨基酸殘基的多肽。廣泛分布于哺乳動物的中
樞神經(jīng)系統(tǒng)。NPY 可收縮血管,升高血壓,對心臟表現(xiàn)為負(fù)性肌力作用。近有作者證實血小
板有合成 NPY 的能力。NPY 含量與應(yīng)激反應(yīng)程度有關(guān),當(dāng)出血性休克時,NPY 釋放增加對維
持全身血壓穩(wěn)定和調(diào)節(jié)器官血流量具有重要的代償作用。研究各種病理狀態(tài)血漿及血小板 NPY
含量與釋放的改變及其病理生理意義,對心腦血管疾病的防治具有廣闊的研究前景。
測定盒組成:
1、緩沖液一瓶。
2、分離劑(第二抗體)一瓶。
3、NPY 抗體一瓶,用前加 ml 緩沖液稀釋。
4、NPY 標(biāo)記一瓶,用前加 ml 緩沖液稀釋。
5、NPY 標(biāo)準(zhǔn)品五瓶:用前每瓶加 ml 緩沖液稀釋 33、100、300、600、1200pg/ml。
6、抑肽酶一瓶。
7、10%EDTA.Na2 一瓶。
樣品收集:
1、取靜脈血 3ml 注入含 10%EDTA.Na2 40ul 和抑肽酶 10ul(含 100U/ml 以上)的試管中,
混勻 4℃,3000 轉(zhuǎn)/分 離心 10 分鐘,分離血漿(溶血樣品影響測定結(jié)果)。如需要可分裝 2-3
份保存,放-20℃可保存 2 個月,在-70℃以下可存放半年。 測定前,使樣本置于室溫或冷水中
復(fù)融,再次 4℃,3000 轉(zhuǎn)/分 離心 5 分鐘,取上清測定。
2、組織樣品的處理:取出活組織,吸去血跡,稱重,放入 0.2mol/L 1N HAC 1ml 中,然后
在 100℃水浴中煮沸 10 分鐘,勻漿。4℃,3000 轉(zhuǎn)/分 離心 15 分鐘,取上清放-20℃以下保存,
測定時用 PBS 五倍以上稀釋,以調(diào)節(jié) PH 值。另外,每種組織的樣品非特異結(jié)合(U 0 )可能有
差異,每份標(biāo)本單獨做一個 U 0 。取組織的重量視不同組織而異。
3、血漿樣品處理:實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):有少數(shù)患者可能由于使用某些藥物或個體差異,出現(xiàn)血漿
蛋白對抗原抗體反應(yīng)的影響,測定 NPY 值偏低,甚至為零。為排除樣品中蛋白質(zhì)的干擾,可采
用簡易酸性乙醇提取法,
具體步驟如下:
取血漿 0.5ml+1ml 酸性無水乙醇( 100ml 無水乙醇+冰乙酸 1.2ml),放振蕩器上振蕩 1min,4℃,
3500rpm/15min 離心 15min,將上清液倒入青霉素瓶,在 45℃水浴鍋上蒸干(可將水浴鍋溫
度調(diào)到 80℃左右,鍋口上放一鋁板,鋁板上溫度約 40~45℃,將青霉素瓶置于鋁板之上),大
約需 24 小時樣品可以*干燥,干燥后將青霉素瓶加蓋,封口,放-20℃保存。
測定前,每瓶加 PH7.4 PBS 0.5ml 溶解,混勻,倒入塑料管中,放-20℃ 4h 以上至樣品*
凍結(jié),然后取出放置 4℃*溶解,取上清 200ul 測定用。
注:從 4℃取出后,一定要輕拿輕放,千萬不要再振蕩混勻,不要在室溫放置過久,zuihao現(xiàn)加現(xiàn)
取。
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