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過氧化氫酶(CAT)試劑盒現(xiàn)貨供應,歡迎訂購

時間:2015-1-13閱讀:1323
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上海信帆生物技術有限公司 www.shxfkj。。com  代理銷售過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒,現(xiàn)貨供應,歡迎!

過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒說明書
測定意義:
微量法 100 管/96 樣 CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是zui主要的 H2O2 清除酶, 在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理:
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠分解 H2O2,使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反 應時間而下降,根據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、 研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 125μL×1 瓶,4℃保存。 粗酶液提?。?1、細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液, 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置 冰上待測。 2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 240nm,蒸餾水調(diào)零。 2、CAT 檢測工作液的配制:用時在試劑二中加入 25mL 試劑一,充分混勻,作為工作液。 3、測定前將 CAT 檢測工作液在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。 4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,立即混勻并計時,記錄 240nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算 ΔA=A1-A2。 CAT 活性計算: a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下 1、血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)= [ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=459×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 CAT 活力計算: (1)按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr (2)按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=459×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞密度計算:
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單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.917×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:H2O2 摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:比 色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反 應時間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總數(shù), 500 萬。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、血清(漿)CAT 活力的計算: 單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=918×ΔA 2、組織、細菌或細胞中 CAT 活力計算: (1)按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr (2)按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=918×ΔA÷W (3) 按細菌或細胞密度計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.836×ΔA V 反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:H2O2 摩爾消光系數(shù),4.36×104 L / mol /cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.01 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T: 反應時間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細胞或細菌總 數(shù),500 萬。

過氧化氫酶(Catalase,CAT)試劑盒

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