上海信帆告訴大家:電泳緩沖液

上海信帆生物代理銷售  電泳緩沖,現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎。概述編輯 

電泳緩沖液是指在進(jìn)行分子電泳時(shí)所使用的緩沖溶液，用以穩(wěn)定體系酸堿度。常見的核酸電泳緩沖液有：TAE、TBE、TPE和MOPS等。

作用

緩沖液在電泳過(guò)程中的一個(gè)作用是維持合適的pH。電泳時(shí)正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，正極發(fā)生的是氧化反應(yīng)（4OH--4e->2H2O+O2)，負(fù)極發(fā)生的是還原反應(yīng)（4H++4e->2H2)，長(zhǎng)時(shí)間的電泳將使正極變酸，負(fù)極變堿。一個(gè)好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強(qiáng)的緩沖能力，使溶液兩極的pH保持基本不變。

電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應(yīng)含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時(shí)電泳速度變慢；太高時(shí)就會(huì)造成過(guò)大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。

電泳緩沖液還有一個(gè)組分是EDTA，加入濃度為1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等離子，防止電泳時(shí)激活 DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

特點(diǎn)

TAE是使用zui廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量（TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量），且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是緩沖容量小，長(zhǎng)時(shí)間電泳不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。

TBE的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間電泳時(shí)可選用TBE，并且當(dāng)用于電泳小于1kb的片段時(shí)分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使DNA段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。

TPE的緩沖能力也較強(qiáng)，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過(guò)程中析出，所以也不宜在回收DNA段的電泳中使用。

2配制方法編輯

50×TAE Buffer 配制方法：

1。稱量氨基丁三醇 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L燒杯中；

2。向燒杯中加入約800ml去離子水，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/P>

3。加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；

4。用NaOH調(diào)pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時(shí)稀釋50倍 即1×TAE Buffer

10×TBE Buffer配制方法：

1。稱量氨基丁三醇 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L燒杯中；

2。加入約800ml去離子水，攪拌均勻；

3。用NaOH調(diào)pH至8.3，加去離子水定容至1L后，室溫保存。

使用時(shí)稀釋10倍 即1×TBE Buffer

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