上海信帆生物科技有限公司
中級會員 | 第13年

13764793648

基質(zhì)金屬蛋白酶/明膠酶譜法試劑盒
ELISA試劑盒
干擾物質(zhì)
血清及相關類產(chǎn)品
生化法試劑盒
實驗代測服務項目
質(zhì)控品/校準品
RIA免疫檢測
品牌生化試劑
檢測試劑盒
抗體和抗原
胰島素(Insulin)試劑盒
補體蛋白試劑盒
腫瘤壞死因子elisa試劑盒
白介素Elisa試劑盒
化學溶液
檢測試劑
GIBCO培養(yǎng)基
商城
染色試劑
試劑
生化指示劑
標準物質(zhì)
科研用二抗
動物紅細胞懸液
生物試劑
染色液
科研細胞
生化試劑
生化實驗代測
細胞因子及重組蛋白
合成多肽

RIPA裂解液的詳細介紹,RIPA裂解液*

時間:2015-10-30閱讀:1367
分享:

RIPA 裂解緩沖液 (RIPA Lysis Buffer)

 

描述: RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用,是經(jīng) 典和zui常用的細胞組織快速裂解液。使用 RIPA Buffer 制備用于 Western 特別是用于免疫共沉淀的 裂解產(chǎn)經(jīng)的標,大部分抗,免疫實驗。

組成: 100 ml RIPA Buffer50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

儲存:4  ℃保存 制備細胞裂解產(chǎn)物

1. 800g 4℃離心 5 分鐘收集培養(yǎng)細胞,估計細胞離心后的體積(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells

=~100 ml PCV);

2.  50100 ml PCV 加入 5 倍體積 RIPA 裂解緩沖液(250~500 ml,冰浴放置 10 分鐘,并每隔

分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒;

3. 12000g 4℃離心 10 分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得細胞總蛋白產(chǎn)物;

 注意:假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠,可先 95℃加熱 5 分鐘,迅速冰浴 5 分鐘,然后再進行步驟 3

制備組織裂解產(chǎn)物

1.  50-100 mg 組織在冰上剪成碎片,用預冷的 PBS 洗滌 2 次離心棄去 PBS;

2. 加入 0.5-1 ml 預冷 RIPA 裂解緩沖液;

3. 4漿漿 20-40 , 95胞被, 1,

分鐘在漩渦混合儀上振蕩 30 秒;

4. 12000g 4℃離心 10 分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得組織總蛋白產(chǎn)物;

 注意:假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠,可先 95℃加熱 5 分鐘,迅速冰浴 5 分鐘,然后再進行步驟 4

說明:

1. 在轉(zhuǎn)移上清液時不要吸入底部的沉淀物;

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時在實驗前進行蛋白的提取,以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解;

3. 在該 RIPA 裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑,用戶可自行選擇添加。

 

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言