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 組織樣本中甘油含量檢測(cè)試劑盒

 甘油測(cè)定

1. 參見(jiàn)下表加樣。待測(cè)樣品體積 10µl，多加可能會(huì)抑制反應(yīng)。

2. 37oC 或 25oC 反應(yīng) 10 分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60 分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

3. 先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管 OD 值。

4. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附 Excel 作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管 OD 值為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 x 軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)?，選擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2 值-。

5. 以每 mg 蛋白濃度或細(xì)胞數(shù)校正甘油含量。見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明：

1.血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測(cè)試。

2.紅細(xì)胞糖酵解時(shí)合成磷酸甘油影響測(cè)定。

原理：在 ATP 存在下甘油被甘油激酶磷酸化為 3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過(guò)氧化

氫；在過(guò)氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。

適用范圍：測(cè)定實(shí)體組織、細(xì)胞中的甘油濃度。組成 (105 次微板測(cè)定或 30 次 1 ml 比色杯測(cè)定)：

(1) 裂解液 50 ml

(2) R1 試劑 16 ml

(3) R2 試劑 4 ml

(4) 4 mmol/L 甘油標(biāo)準(zhǔn)品 1 ml

4 oC，儲(chǔ)存 3 月。

所需設(shè)備：酶標(biāo)儀、生化分析儀或 721、722 型可

見(jiàn)光分光光度計(jì)。佳工作波長(zhǎng) 550nm，如無(wú)此波

長(zhǎng)建議優(yōu)先選用 570nm、次選 530、490nm。

一 組織細(xì)胞裂解

細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解： 消化、離心收集細(xì)胞?；蛑苯釉谂囵B(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個(gè)細(xì)胞，75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液，混勻，靜置 10 分鐘。

動(dòng)物組織裂解：

切記要預(yù)先將新鮮組織切稱重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切、稱重可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的測(cè)量誤差。離心管精確稱重，加入組織塊后再稱重，二者相減(即減量稱重法)計(jì)算組織量(約 100mg)。強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提?。?。用電動(dòng)高速勻漿器或手動(dòng)玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。

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