78833核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒Thermo

使用Thermo Scientific NEPER核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒可以在兩小時以內(nèi)分別抽提出胞漿和核蛋白組份。該方法是微量離心管方法，主要步驟包括首先用含有去垢劑的低滲緩沖液裂解細(xì)胞，然后微量離心以便沉淀完整的細(xì)胞核，此后去除胞漿組分，zui終裂解細(xì)胞核。一般使用該方法所得的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核組分之間的交叉污染<10%。一般從2x10⁶個細(xì)胞中能夠抽提出胞漿蛋白200-500μg，細(xì)胞核蛋白100-200μg（濃度>1mg/ml）。可以通過改變抽提中所用的核抽提試劑（NER）的量而調(diào)整所需要的蛋白濃度而不會影響抽提效率。

從細(xì)胞中專一地抽提核蛋白是許多基因調(diào)節(jié)研究中成功的關(guān)鍵因素。然而目前大多數(shù)分離細(xì)胞核、制備核蛋白抽提物的方法需時很長并且需要機(jī)械勻漿、反復(fù)凍融、超速離心或者透析等步驟，而這些步驟很可能會影響到許多脆弱的核蛋白的完整性。NE-PER*試劑盒解決了這些問題，可以得到高質(zhì)量濃縮的核蛋白抽提物，所得的抽提物可用于EMSA及其它分析技術(shù)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

快速–在兩小時以內(nèi)獲得核組分和胞漿組分。

簡單–使用臺式微量離心機(jī)和微量離心管方法，因此不需要繁瑣的反復(fù)凍融、杜恩斯勻漿、長時間的離心以及低溫試驗(yàn)。

通用–從同一個組織或細(xì)胞樣品中即可分別獲得其細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)抽提物。

相容性強(qiáng)–抽提物可用于蛋白免疫印跡、凝膠阻滯分析、蛋白定量分析、報告基因分析以及酶活性分析等下游應(yīng)用。

利用Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞漿蛋白抽提試劑盒從多種哺乳動物細(xì)胞系中制備的胞漿組分和核組份的蛋白量。利用Thermo Scientific BCA微量蛋白定量分析試劑盒（產(chǎn)品貨號 23235）進(jìn)行蛋白定量。顯示的數(shù)值為兩次單獨(dú)分離的平均值。

對HeLa細(xì)胞的胞漿及核組分進(jìn)行蛋白免疫印跡分析，結(jié)果顯示交叉污染極少。利用4-20% 梯度Tris－甘氨酸變性凝膠對總蛋白量（20μg）相等的四種樣品進(jìn)行電泳。將蛋白轉(zhuǎn)移到醋酸纖維素膜上，用含有3%BSA的Tris緩沖液進(jìn)行封閉。A. 用抗Oct-1的抗血清（1:400）進(jìn)行結(jié)合，然后利用1:100,000的標(biāo)記辣根過氧化物酶的二抗進(jìn)行結(jié)合。B. 用抗hsp90的抗血清（1:400）進(jìn)行結(jié)合，然后利用1:50,000的標(biāo)記辣根過氧化物酶的二抗進(jìn)行結(jié)合。兩個分析所用的底物均為用于蛋白免疫印跡的SuperSignal皮克級化學(xué)發(fā)光底物（產(chǎn)品貨號 34080）。

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