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分光光度計的測量原理
分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū),

A=-log(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸收度;
I。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;

T 為物質(zhì)的透射比;
k 為吸收系數(shù);
L 為被分析物質(zhì)的光程
c 為物質(zhì)的濃度
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長,以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū),除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。