上海雨晨生物技術(shù)有限公司為您提供:“小鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞";本公司長期代理ATCC,Sciencell,ICLC等國內(nèi)外細(xì)胞株,原代細(xì)胞。了解更多信息請咨詢在線客服或銷售人員:
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M:(葉)
產(chǎn)品名稱:小鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞【Mouse Eye:Normal Trabecular Meshwork Cells】
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點:原代細(xì)胞
包裝:內(nèi)層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細(xì)胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:現(xiàn)貨 期貨:2-4周
運輸方式:聯(lián)邦快遞
供應(yīng)商:上海雨晨生物技術(shù)有限公司
售后服務(wù):
收到細(xì)胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真或致銷售人員,我們將盡快為您解決。
使用說明:
收到細(xì)胞后應(yīng)如何去正確的處理:
您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導(dǎo)致對細(xì)胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。
1.收到細(xì)胞,*時間要鏡檢:觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度,有疑議及時咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細(xì)胞聚集在一起,但是細(xì)胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。
2.當(dāng)通過上一步的觀察,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問題時,進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。細(xì)胞在低于正常生長溫度情況下,會調(diào)整為靜止期,或者慢速生長期,必須恢復(fù)37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調(diào)整到接近對數(shù)生長期的狀態(tài),在對數(shù)生長期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。
3.如果經(jīng)*步觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細(xì)胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細(xì)胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細(xì)胞類型,一次少傳些,保證每瓶細(xì)胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細(xì)胞,*次處理也可以依照第二種情況。
傳代操作:
1.吸除培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2.加入無菌pbs洗液(5-8mL)輕輕潤濕細(xì)胞,稀釋多余的培養(yǎng)基,之后吸走洗液,動作要輕,不可吹打到細(xì)胞。
3.向瓶內(nèi)加入含0.25%EDTA的胰蛋白酶混合液少許,以能覆滿瓶底為限。
4.置溫箱中2~5分鐘,一旦鏡檢發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大后,細(xì)胞變圓,比較松動后,立即終止消化。
5.加入該細(xì)胞對應(yīng)的培養(yǎng)基6mL(T25培養(yǎng)瓶)或12mL(T75培養(yǎng)瓶)終止消化。
6.用吸管通過吸取的培養(yǎng)基輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。吹打時應(yīng)盡量以zui少的次數(shù)將細(xì)胞從壁上吹下,不僅要控制吹打的力度、次數(shù),還要注意要將細(xì)胞盡可能吹成單個。這樣既能減少死細(xì)胞,又能便于細(xì)胞再次均勻貼壁生長。
7.依據(jù)傳代比例,將細(xì)胞懸液分瓶,再補(bǔ)充培養(yǎng)基后,靜置于溫箱培養(yǎng),直止貼壁。
貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,繼續(xù)生長的空間不足,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多,同時代謝廢物也有較多堆積,需要分瓶培養(yǎng),對細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增。對于貼壁不太緊的細(xì)胞如293,可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO,則需要以胰酶消化后再吹散分瓶。以筆者的經(jīng)驗,以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好,但對于經(jīng)驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的。
胰酶消化的程度是一個關(guān)鍵:消化過度則對細(xì)胞的活性影響較大,并有部分細(xì)胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。影響消化速度的因素較多,主要有胰酶溶液的活性(配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、解凍后存放時間及溫度等)、消化時的溫度(氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度)以及所加胰酶溶液的多少等。含有EDTA的胰酶會比不含的消化能力強(qiáng)很多,不同細(xì)胞對消化液的敏感性也不同,比如HEP-G2人肝癌細(xì)胞,該細(xì)胞消化時間可長達(dá)10分鐘左右。 消化時間仔細(xì)去摸索一下,每過2分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄*消化時間,下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。
對于懸浮細(xì)胞換液時只需要補(bǔ)液就行。
懸浮細(xì)胞的傳代則不需要用胰酶消化,直接通過計數(shù)算好傳代的比例,直接分瓶,補(bǔ)液。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長,此時細(xì)胞生長狀態(tài)良好,當(dāng)補(bǔ)液時,避免吹打。典型實例:jurkat就是成團(tuán)生長。當(dāng)jurkat細(xì)胞密度比較大時,可將培養(yǎng)瓶豎直放置2分鐘左右,待大部分細(xì)胞沉下,吸走上層清液,補(bǔ)充等量的新鮮培養(yǎng)基。而HL-60就不一樣了,為懸浮單個生長,如果發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞包團(tuán),說明細(xì)胞狀態(tài)不好,不加以正確的處理,zui終會發(fā)生凋亡。