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厭氧培養(yǎng)箱操作規(guī)范

閱讀:1633        發(fā)布時(shí)間:2014-12-29

一、操作室厭氧環(huán)境形成

 

1 按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無(wú)毒塑料袋。

2 通電源開(kāi)照明燈,開(kāi)控溫儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。

3 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。

4 關(guān)緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗(yàn)。

5 操作室內(nèi)*次置換(氮?dú)庵脫Q):

(1)先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋。

(2)接通氮?dú)膺M(jìn)氣路,打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y,使二只塑料袋充足氮?dú)猓缓笤o袋口。

(3)把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。

(4)把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi),至全部放出。

6 操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一 次充氮過(guò)程,并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。

7 操作室第三次置換(混合氣體置換):

    (混合氣體配比為:N2↑ 85%  H2 ↑ 10%  CO2↑ 5%)

(1)調(diào)換氣路打開(kāi)混合氣道通閥門進(jìn)氣,充氣時(shí)要隨時(shí)腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。

(2)混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經(jīng)過(guò)流量計(jì)輸入操作并調(diào)整流量計(jì),流量為每分鐘10毫升左右。

(3)把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。

(4)通過(guò)三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。

8 操作室內(nèi)打開(kāi)鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一 小時(shí)后打開(kāi)美蘭指示劑(美蘭安瓶)觀察其變色情況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。

9 開(kāi)紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間自定。

 

二、菌種的置入和培養(yǎng)

 

1 檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊之。

2 打開(kāi)取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門。

3 取樣室充氮置換三次過(guò)程:先抽真空度500毫米汞柱(66Kpa)以上停,然后人工打開(kāi)氮?dú)忾y門進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位后進(jìn)行下次操作。

4 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。

5 取樣室內(nèi)外門開(kāi)啟,關(guān)緊要抽低真空度100毫米汞柱(13 Kpa)檢驗(yàn)及幫助操作。

6 厭氧培養(yǎng)箱需要長(zhǎng)期連續(xù)使用的條件:

(1)每天在操作室內(nèi)打開(kāi)美蘭指示劑觀察,正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。

(2)要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補(bǔ)進(jìn)的氫氣能和微量的氧結(jié)合通過(guò)催化吸收,保證了室內(nèi)厭氧狀態(tài),補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。

(3)連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一 天,更換一 次除氧劑和干燥劑。

7 接種棒滅菌器的應(yīng)用:

(1)隨時(shí)用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進(jìn)行殺菌(接種棒)

(2)熔蠟處可直接放上,試管封蠟口旋轉(zhuǎn)熔蠟。

8  操作室里的培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度可任意選擇和控制。

9  混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力為0.1Mpa左右。

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