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研究幾種酸純化的具體方法
閱讀：1773發(fā)布時間：2017-6-19
今天來介紹幾種酸純化的具體方法，以核酸為例，核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的zui重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。
1.PC抽提法
PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提時獲得DNA殘留極少的RNA。不過有一點要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用PC抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉，對實驗條件要求較低，對于經(jīng)費緊張的實驗室較為實用。
2.離心柱法
離心柱酸純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其zui大特點是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進(jìn)入另外一個離心管中，與含有核酸的柱子*是分開的，所以洗滌更*。其致命弱點是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。
3.生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動，從而達(dá)到固液分離純化的作用。
1.PC抽提法
PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提時獲得DNA殘留極少的RNA。不過有一點要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用PC抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提zui大的優(yōu)勢是成本低廉，對實驗條件要求較低，對于經(jīng)費緊張的實驗室較為實用。
2.離心柱法
離心柱酸純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其zui大特點是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC純化方法更高)。加入的液體通過離心后會進(jìn)入另外一個離心管中，與含有核酸的柱子*是分開的，所以洗滌更*。其致命弱點是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。
3.生物磁珠法
生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動，從而達(dá)到固液分離純化的作用。
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