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淺析慢病毒包裝的主要流程
閱讀：2956 發(fā)布時(shí)間：2015-12-16
慢病毒屬是反轉(zhuǎn)錄病毒科下的一個(gè)屬，包括8種能夠感染人和脊椎動(dòng)物的病毒，原發(fā)感染的細(xì)胞以淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，感染個(gè)體zui終發(fā)病，慢病毒感染的顯著特點(diǎn)是感染個(gè)體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長(zhǎng)達(dá)數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱(chēng)為慢病毒，例如：人類(lèi)免疫缺陷病毒(HⅣ）、猴免疫缺陷病毒(SⅣ）、馬傳染性貧血(EIA）、貓免疫缺陷病毒(FⅣ）等等。
慢病毒包裝的主要流程：
1、慢病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)不同的研究需求構(gòu)建慢病毒載體，如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過(guò)表達(dá)的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等；
2、慢病毒包裝過(guò)程：將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至包裝細(xì)胞中，收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，對(duì)其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細(xì)胞中測(cè)定并標(biāo)定病毒滴度。
慢病毒包裝的注意事項(xiàng)：
1、在慢病毒感染細(xì)胞前，為檢測(cè)病毒上清培養(yǎng)液內(nèi)病毒的活性，并確定病毒與轉(zhuǎn)染細(xì)胞之間的比率，需要確定病毒的滴度。病毒的滴度可以通過(guò)轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，然后使用抗體篩選穩(wěn)定的細(xì)胞轉(zhuǎn)染株，進(jìn)行計(jì)數(shù)和數(shù)值統(tǒng)計(jì)。
2、在慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞的過(guò)程中zui重要的一步是融合，只有一些較小的慢病毒載體才能轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)細(xì)胞，因此，病毒顆粒的吸附是慢病毒轉(zhuǎn)染的限速步驟。
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