熒光定量PCR檢測是實時熒光定量PCR技術(shù)（Real Time Quantitative PCR）一種常用方法，可對目標DNA分子起始拷貝數(shù)做相對定量。因其檢測方法精確、靈敏、污染途徑少，已成為核酸分子定量的標準方法，應用到多種研究中，如藥物處理前后細胞mRNA表達量變化、不同組織mRNA表達量差異、基因芯片結(jié)果驗證、RNAi效果確認（siRNA篩選），病毒、病原菌等致病微生物拷貝數(shù)檢測

 實時熒光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）

熒光定量PCR技術(shù)服務介紹：

實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣泛應用。
     實時熒光定量PCR：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
     定量PCR儀是在普通PCR儀的基礎上加裝了熒光激發(fā)裝置和熒光檢測裝置，PCR擴增和檢測同時進行，zui終結(jié)果不需進行電泳檢測，所以有效地避免了樣品間的交叉污染。

相對定量用于測定一個測試樣本中目標核酸序列與校正樣本中同一序列表達的相對變化。校正樣本可以是一個未經(jīng)處理的對照或者是在一個時辰研究中處于零時的樣本。

相對定量應用（Relative Quantification，RQ）

非特異性熒光標記：SYBR Green

SYBR Green特性：

只有和雙鏈DNA結(jié)合后才發(fā)熒光。變性時，DNA雙鏈分開，無熒光。在延伸結(jié)束階段采集熒光信號。SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光，所以必須在反應結(jié)束時做熔解曲線分析。

相對定量通過內(nèi)標定量
內(nèi)標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因
在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小
內(nèi)標定量結(jié)果代表了樣本中所含細胞或基因組數(shù)量

相對定量分析方法1    2-ΔΔCt
前提：目標序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
 1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標基因的CT值：
   ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
   ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
 2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
        ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
 3、計算表達水平比率：
                   2 –ΔΔCT=表達量的比值

服務流程：

注意：客戶可根據(jù)所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動項目。

我司分子生物學技術(shù)服務項目包括：
       熒光定量PCR，反轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測；PCR產(chǎn)物克隆，TA克隆，亞克??；RNAi干擾檢測；miRNA檢測；質(zhì)粒載體構(gòu)建等