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超微量分光光度計有哪些使用限制?
超微量分光光度計是現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)使用儀器,在生命科學(xué)實驗室應(yīng)用廣泛,但是我們必須了解一下分光光度計的一些使用限制,這樣才不會出現(xiàn)失誤或者產(chǎn)生危險。
在說使用限制之前,我們先來了解一下超微量分光光度計的工作原理是物質(zhì)對光的選擇吸收和瑯伯-比爾定律。,超微量分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
論瑯伯-比爾定律的限制性條件:
其一:通過溶液的光必須是平行的;
其二:通過溶液的光必須是單色光;
其三:待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高,這是瑯伯-比爾定律首要的三個前提條件。
在實際的分光光度計的制造和使用過程中這三個條件是不可能達(dá)到的:
其一:因為光是直線傳播的,在分光光度計制造過程中,燈源發(fā)出的光是發(fā)散的,經(jīng)過聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過溶液的整體過程中,光是不可能平行的。
其二:燈源發(fā)出的光是復(fù)合光,經(jīng)過狹縫,再經(jīng)過光柵分光等步驟,因為受到狹縫和光柵本身的限制,光柵分光不可能達(dá)到純單色光。還有光度計的整體設(shè)計問題,光度計不可能沒有其它的雜光存在。
其三:用戶的溶液也不可能是純凈的,也會含有一些雜質(zhì),這些對光度的吸收都會存在影響。除以上三個方面的影響外,在實際的光度計應(yīng)用過程中還會存在其他因素的影響,例如:
1、經(jīng)過比色皿的光是否垂直;
2、比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值;
3、測試波長是否準(zhǔn)確;
4、程序設(shè)計是否存在漏洞等等,都會直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結(jié)果。
所以在日常的測試過程中,得出的結(jié)果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的,只是我們關(guān)注偏差多少的問題。
關(guān)于超微量分光光度計的使用限制就給大家介紹到這里了,更多超微量分光光度計資訊請繼續(xù)關(guān)注邁上。