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青蒿素與菌液測(cè)定的前世今生
由屠呦呦團(tuán)隊(duì)深度開發(fā)的青蒿素研究,在近有了新的進(jìn)展-通過(guò)增加用藥周期和聯(lián)合用藥解決瘧原蟲對(duì)其耐藥性[1]。而青蒿素也面臨著價(jià)格昂貴及供應(yīng)不足的難題,研究者利用菌體構(gòu)建合成青蒿素的前體的研究[2]能夠提供參考思路。
菌體的生長(zhǎng)情況可用OD600初步判斷菌落生長(zhǎng)情況并間接測(cè)定菌落的密度,
是因?yàn)槟程囟úㄩL(zhǎng)下,菌懸液的細(xì)胞濃度僅在一定的范圍內(nèi)與對(duì)應(yīng)的吸光度值呈正比關(guān)系,不同的是,針對(duì)非球狀的放線菌和某些霉菌等以及培養(yǎng)基中有其他渾濁物質(zhì)則不能通過(guò)該方法推斷濃度。
如果菌液OD600在0.6-0.8之間,表明細(xì)菌處于旺盛生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞生長(zhǎng),OD600>3表明細(xì)菌已經(jīng)飽和等,這些僅僅是粗略估計(jì)菌落的生長(zhǎng)情況。
想要知道較為的菌落濃度,需要將制備好的菌懸液梯度稀釋后,以未加菌液的培養(yǎng)基做空白對(duì)照,使用分光光度計(jì)分別測(cè)定OD600;并用平板計(jì)數(shù)法計(jì)算菌落總數(shù)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,來(lái)推算未知濃度菌液的生長(zhǎng)狀態(tài)。
若某一菌液的OD值為負(fù),可能是細(xì)菌與培養(yǎng)基發(fā)生變色反應(yīng),顏色的改變影響吸光度數(shù)值。菌液在測(cè)定前保持懸浮狀態(tài)能夠保證測(cè)定的準(zhǔn)確性。
由于600nm處對(duì)濁度的敏感度高,常用600nm為檢測(cè)波長(zhǎng),也可以對(duì)菌液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,在其大吸收峰波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定。
[1] Wang J, Xu C, Liao F L, et al. A Temporizing Solution to “Artemisinin Resistance”[J]. New England Journal of Medicine, 2019.
[2]吳濤, 吳勝明, 殷晴, 等. 在大腸桿菌內(nèi)引入甲羥戊酸途徑合成抗瘧藥青蒿素前體——紫穗槐-4,11-二烯[J]. 生物工程學(xué)報(bào), 2011, 27(7).