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當(dāng)我們提取核酸時(shí),都發(fā)生了什么?
2020年初, “核酸檢測(cè)”的概念由于*的原因突然正式“出圈”,成為了一時(shí)之間大眾口中的熱詞。此中,自動(dòng)化核酸提取設(shè)備由于操作簡(jiǎn)單、通量高、速度快的優(yōu)點(diǎn)而迎來了罕見的廣泛追捧,那么,當(dāng)它究竟都實(shí)現(xiàn)了哪些工作呢?
有些小伙伴可能反手就是一個(gè)流程原理圖:
那更進(jìn)一步的解釋呢?
重點(diǎn)來了!
裂解:通常裂解液中會(huì)含有洗滌劑,根據(jù)樣本的不同還會(huì)添加蛋白酶,用于裂解和溶解蛋白質(zhì);另外還有高濃度的離液鹽,如異硫氰酸胍,它能擾亂氫鍵,破壞核酸與水之間的結(jié)合,使核酸能夠與磁珠結(jié)合。
通過這里我們能夠理解:1.為什么裂解步驟經(jīng)常需要加熱;2.為什么裂解液會(huì)容易起泡;3.為什么裂解的步驟需要長(zhǎng)時(shí)間的混合。
洗滌:洗滌液中通常含有較大比例的乙醇,一方面能降低溶液介電常數(shù)使核酸沉淀以更好的結(jié)合,另一方面能洗去殘留的鹽;有時(shí)候這里還會(huì)有部分離液鹽,用以去除上一步殘留的蛋白質(zhì)。
通過這里我們能夠理解:1.添加無水乙醇的作用;2.不同洗滌步驟的目的區(qū)別。
洗脫:由于在上一步中經(jīng)過了較大體積的乙醇,在正式洗脫磁珠之前通常會(huì)經(jīng)過“晾干”,充分利用乙醇的易揮發(fā)性,避免乙醇的殘留影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。當(dāng)乙醇被去除,核酸分子恢復(fù)親水性,在弱堿性的洗脫液中,核酸被輕易地溶解,從而從磁珠上被解放出來。
至此,完整的核酸提取流程就結(jié)束了,通過流程的清晰化,能夠更好地優(yōu)化試劑盒-儀器之間的磨合,縮短磨合時(shí)間,節(jié)約時(shí)間、人力與經(jīng)濟(jì)成本。
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