質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白功能

蛋白組學(xué)的另一個重要任務(wù)是鑒定在一個基因序列里被編碼的蛋白的功能和作用。蛋白組技術(shù)使人們能夠通過一些新的策略，而快速獲取這些信息。這些策略包括：基于“牽連犯罪” 概念的方法；根據(jù)活性將蛋白富集再鑒定；全細(xì)胞或細(xì)胞器分析等。

定性蛋白組學(xué)的zui終目的是完成對所有存在蛋白的全覆蓋。要達(dá)到這個目的，所有的蛋白需要被適當(dāng)?shù)叵獠⒖扇堋Ｊ褂枚嗟鞍酌赶饪梢蕴岣咝蛄懈采w度。此外，像電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）這樣的新方法可以使人們有效地碎片化更大尺寸的肽段。高的序列覆蓋度有益于分辨蛋白的亞型。對于復(fù)雜的混合物，例如細(xì)胞或組織裂解液，離子抑制和動態(tài)范圍是兩個挑戰(zhàn)。如果能夠很好地降低或消除離子抑制，那么就可以更加均一地實現(xiàn)肽的離子化，從而改善定性和定量分析。動態(tài)范圍方面的挑戰(zhàn)除了與離子抑制有關(guān)外，主要是和質(zhì)譜儀器的檢出限有關(guān)。除了離子抑制和動態(tài)范圍外，第三個問題是質(zhì)譜的峰容量。針對這個問題，可采用的一個變通的策略就是所謂的“數(shù)據(jù)獨立采集（DIA）”，它已成為一個商品化技術(shù)。隨著質(zhì)譜儀器掃描速度變得越來越快，采用DIA技術(shù)進(jìn)行鑒別也就變得越發(fā)可行。我們可以看到，每一代串聯(lián)質(zhì)譜較之其上一代都會有顯著的改進(jìn)，這推動著蛋白組學(xué)向獲得一個完整蛋白組發(fā)展。不過，如何判定何時算是我們獲得了一個完整蛋白組依然是很困難的。此外，獲得一個完整蛋白組的關(guān)鍵是要有一個合理的實驗策略，而非采用一個耗時的“蠻力搜索”策略。