免疫共沉淀

服務(wù)目的：

測(cè)定兩種目的蛋白質(zhì)是否在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合；也可用于測(cè)定確定某種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
服務(wù)原理：

以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法，當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。
服務(wù)材料：
試劑：蛋白提取試劑盒、非離子變性劑（NP-40、TritonX-100）、PBS、TBS、相應(yīng)的IgG、Protein A 或Protein G瓊脂糖凝膠珠、SDS-PAGE電泳、上樣緩沖液。
儀器：振蕩器、蛋白電泳儀、恒溫箱、脫色搖床。

服務(wù)流程：
1）用其特定蛋白的抗體與ProteinA/G相結(jié)合(Flag IP Kit已結(jié)合上)；
2）用抗體成點(diǎn)特定蛋白，特定蛋白已結(jié)合了與其相互作用蛋白；
3）通過洗滌得到純復(fù)合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過WB方法檢測(cè)其IP結(jié)果；
4）提交WB圖與分析結(jié)果和實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
服務(wù)方法：
1、蛋白樣品準(zhǔn)備。收集細(xì)胞或組織，在非變性條件下裂解細(xì)胞，釋放蛋白。
2、選做去除非特異性結(jié)合。取待測(cè)樣品，選用和免疫共沉淀時(shí)使用的IgG種屬相同的普通IgG與瓊脂糖凝膠珠混合，4^oC慢搖30min-2h。離心取上清。
3、免疫共沉淀。加一抗，4^oC慢搖過夜。加瓊脂糖凝膠珠，4^oC慢搖1~3h。瞬時(shí)離心棄上清。PBS洗沉淀5次。
4、加電泳上樣緩沖液，煮沸用于SDS-PAGE電泳。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會(huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

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