細(xì)胞Hoechst凋亡染色/細(xì)胞凋亡檢測

細(xì)胞Hoechst凋亡染色

服務(wù)簡介：

Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激發(fā)。都在461nm處發(fā)出藍(lán)靛色熒光光。Hoechst染色時無需用DAB來顯色，它直接結(jié)合細(xì)胞的DNA ，經(jīng)過紫外光激發(fā)后發(fā)出藍(lán)色熒光。

服務(wù)原理：

Hoechst是可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對細(xì)胞的毒性較 低。 熒光染料Hoechst能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst比正常細(xì)胞的多，熒光強(qiáng)度 要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不 能有效地將Hoechst排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。

服務(wù)流程：
1、可貼壁細(xì)胞生長于含有蓋玻片的培養(yǎng)皿中,或?qū)⒎琴N壁細(xì)胞懸浮培養(yǎng)；
2、將HOECHST加入培養(yǎng)皿,終濃度為10ug/ml,37℃孵育30min；
3、加入4%PF,與培養(yǎng)液1:3混合,固定細(xì)胞5-10min；
4、固定后將長有細(xì)胞的蓋玻片用封片劑封于載玻片；
5、熒光顯微鏡下觀察。

客戶提供：
1、組織樣品：新鮮組織放入液氮或-80度保存，組織不少于100mg；
2、培養(yǎng)細(xì)胞：通過細(xì)胞計數(shù)取不少于2×10⁶個細(xì)胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱（-80℃，避免反復(fù)凍融）；
3、血液細(xì)胞標(biāo)本：以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，保存（-80℃可長期保存，避免反復(fù)凍融）；
4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本：離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，保存（4℃可保存15-20天，-80℃可長期保存，避免反復(fù)凍融）；
5、石蠟切片，冰凍切片以及細(xì)胞爬片，涂片等。
6、樣本運(yùn)輸：可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本
組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后，加冰袋寄送；
細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶（密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出）；
血清或上清液直接加冰袋寄送（送視路程遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá)）。

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。

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