怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能？

時(shí)間：2022/10/14閱讀：969

怎么使Waters ACQUITY BEH色譜柱保持良好的性能？

為確保Waters ACQUITY BEH色譜柱始終保持理想性能，請(qǐng)遵循以下原則：

a. 樣品前處理

1. 樣品中的雜質(zhì)往往會(huì)污染色譜柱。避免污染的方法之一是在分析之前使用填充有適合填料的Waters Oasis™固相萃取小柱/色譜柱或Sep-Pak™小柱凈化樣品。

2. 為獲得理想峰形和靈敏度，優(yōu)先選用運(yùn)行分析時(shí)擬用的流動(dòng)相或比它更弱的流動(dòng)相來制備樣品。除非安裝了正己烷/四氫呋喃兼容性配件包，否則切勿將丙酮用作樣品溶劑/稀釋劑。

3. 如果樣品不溶于流動(dòng)相，請(qǐng)確保樣品、溶劑和流動(dòng)相可以混溶，以避免樣品和/或緩沖鹽析出。

4. 用0.2 _m濾膜過濾樣品，去除顆粒物質(zhì)。如果用于溶解樣品的溶劑含有機(jī)溶劑（如乙腈、甲醇等），請(qǐng)確保濾膜材料不溶于該溶劑。請(qǐng)聯(lián)系濾膜生產(chǎn)商了解濾膜的溶劑兼容性?；蛘?，可以考慮在8000 rpm下離心樣品溶液20 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)臉悠菲恐小?/span>

5. 對(duì)于親水作用色譜(HILIC)分離，樣品必須用高百分比的有機(jī)溶劑制備（例如95%乙腈）。請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。

b. pH范圍

ACQUITY BEH色譜柱的推薦操作pH范圍如下：采用BEH C18、BEH C8和BEH苯基填料為1~12；采用BEH Shield RP18和BEHAmide填料為2~11；采用BEH HILIC填料為1~9。表2列出了常用的緩沖鹽和添加劑。此外，柱壽命將根據(jù)操作溫度、使用的緩沖鹽類型和濃度而有所不同。例如，在高溫下使用pH值為8的磷酸鹽緩沖液會(huì)縮短色譜柱壽命。

c. 溶劑

為了保持理想的色譜柱性能，請(qǐng)使用高品質(zhì)色譜級(jí)溶劑。所有水相緩沖鹽在使用前都應(yīng)使用0.2 _m濾膜過濾。推薦使用PallGelman Laboratory Acrodisc®過濾器。含有懸浮顆粒物的溶劑

通常會(huì)堵塞色譜柱入口篩板，這會(huì)導(dǎo)致操作壓力增大，性能變差。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱相關(guān)章節(jié)。

d. 壓力

ACQUITY BEH色譜柱能夠承受高達(dá)18000psi（1241 bar或124 MPa）的操作壓力。

注：在壓力、pH和/或溫度的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

e. 溫度

為了改善選擇性、降低溶劑粘度和提高傳質(zhì)速率，ACQUITYBEH色譜柱的推薦操作溫度范圍為20 °C~90 °C。在高pH條件下操作時(shí)，建議降低操作溫度以延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。在較高

溫度下（如70 °C以上）運(yùn)行也可能縮短色譜柱使用壽命。在HILIC分析中，BEH Amide色譜柱可以在高pH值和高溫條件下使用，不會(huì)出現(xiàn)問題（請(qǐng)參閱“BEH Amide色譜柱入門"章節(jié)的推薦條件）。

表2.使用ACQUITY BEH色譜柱時(shí)的推薦緩沖鹽

添加劑/緩沖液	pK,	緩沖液范圍	揮發(fā)性(±1個(gè)pH單位)	能否用于質(zhì)譜	注釋
TFA	0.3	—	揮發(fā)性	可用	離子對(duì)添加劑，能抑制MS信號(hào)，在0.02%~0.1%范圍內(nèi)使用。
乙酸	4.76	—	揮發(fā)性	可用	與醋酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。
醋酸鹽(NH3 CH3CO2)	3.75	—	揮發(fā)性	可用	與甲酸銨-起使用時(shí)緩沖能力非常強(qiáng)。在0.1%~ 1.0%范圍內(nèi)使用。
甲酸鹽(NH4HCO2)	4.76	3.76-5.76	揮發(fā)性	可用	在1~10 mM范圍內(nèi)使用。注:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。
磷酸鹽1	3.75	2.75-4.75	揮發(fā)性	可用	在1~10 mM范圍內(nèi)使用。注:其鈉鹽或鉀鹽無揮發(fā)性。
磷酸鹽2	2.15	1.15-3.15	非揮發(fā)性	不可用	常用的低pH緩沖液，具有良好的UV透光性。
磷酸鹽3	7.2	6.20-8.20	非揮發(fā)性	不可用	pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。
4-甲基嗎fei啉	12.3	11.3-13.3	非揮發(fā)性	不可用	pH值大于7時(shí)，需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。
氨水(NH4OH)	~8.4	7.4-9.4	揮發(fā)性	可用	通常在10mM或更低濃度下使用。
碳酸氫銨	9.2 10.3(HCO3-) 9.2 (NH4+)	8.2-10.2 8.2-11.3	揮發(fā)性揮發(fā)性	可用可用	在5~10mM范圍內(nèi)使用(進(jìn)行MS分析時(shí)，需保持源溫度> 150°C)。用氨水或醋酸調(diào)節(jié)pH值。pH=10時(shí)具有良好的緩沖容量。注:請(qǐng)使用碳酸氫銨(NH,HCO),而不是碳酸銨(INH₄)₂CO₃)。
醋酸銨	9.2	8.2-10.2	揮發(fā)性	可用	在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
甲酸銨	9.2	8.2-10.2	揮發(fā)性	可用	在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
硼酸鹽	9.2	8.2-10.2	非揮發(fā)性	不可用	需要降低柱溫/濃度并使用保護(hù)柱，以便盡可能延長(zhǎng)使用壽命。
CAPSO	9.7	8.7-10.7	非揮發(fā)性	不可用	兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10 mM范圍內(nèi)使用。氣味小。
甘氨酸	2.4, 9.8	8.8-10.8	非揮發(fā)性	不可用	兩性離子緩沖液，相較于硼酸鹽緩沖液更有助于延長(zhǎng)色譜柱壽命。
1-甲基哌啶	10.2	9.3-11.3	揮發(fā)性	可用	在1~10 mM范圍內(nèi)使用。
CAPS	10.4	9.5-11.5	非揮發(fā)性	不可用	兩性離子緩沖液，兼容乙腈，在1~10mM范圍內(nèi)使用。氣味小。
三乙胺(用作醋酸鹽)	10.7	9.7-11.7	揮發(fā)性	可用	在0.1%~1.0%范圍內(nèi)使用。僅當(dāng)使用乙酸滴定時(shí)具有揮發(fā)性(使用鹽酸或磷酸滴定時(shí)無揮發(fā)性)。在DNA分析(pH 7~9)中用作離子對(duì)試劑。
吡咯烷	11.3	10.3-12.3	揮發(fā)性	可用	溫和型緩沖液，可延長(zhǎng)柱壽命。

注：在pH、溫度和/或壓力的極值下運(yùn)行會(huì)縮短色譜柱使用壽命。

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