Waters Styragel色譜柱的組安裝

Waters Styragel色譜柱的組安裝

本章包括：

■ GPC/HPLC系統(tǒng)準備

■ 色譜柱安裝

■ 維修損壞的壓力螺釘組件

■ 色譜柱平衡

a. GPC/HPLC系統(tǒng)準備

將色譜柱連接到GPC/HPLC系統(tǒng)的流路之前，必須預先調(diào)試好系統(tǒng)：

1. 通過用零死體積接頭替換舊色譜柱，直接將系統(tǒng)進樣器連接到檢測器。

2. 將系統(tǒng)切換至用于保存色譜柱的溶劑。對于新的色譜柱組，該溶劑為出廠溶劑。

3. 沖洗系統(tǒng)以除去所有微粒和舊的溶劑。依應用需求沖洗進樣器定量環(huán)。

譜帶展寬

所有色譜系統(tǒng)中的連接管路和接頭都會導致柱外譜帶展寬。安裝色譜柱之前，必須確定系統(tǒng)的儀器譜帶展寬（參見測試儀器譜帶展寬部分）。如果此項測試不適用于您的系統(tǒng)，請參閱系統(tǒng)操作員手冊。

用于4.6 mm節(jié)約溶劑色譜柱的窄內(nèi)徑色譜系統(tǒng)窄內(nèi)徑系統(tǒng)的峰體積非常小，這對于譜帶展寬最小化至關(guān)重要。所有連接都盡可能采用最短的管路。無需在檢測器中使用微內(nèi)徑流通池或以任何方式更改您的傳統(tǒng)HPLC系統(tǒng)。整個系統(tǒng)中須采用0.009英寸（0.25 mm）內(nèi)徑的管路。

b.色譜柱安裝

串聯(lián)色譜柱時，使用色譜柱各自隨附的0.009英寸0.25 mm內(nèi)徑的U形色譜柱連接管。

色譜柱排列連接順序一般情況下，分析結(jié)果與色譜柱組的排列順序無關(guān)。但是，為了提高分離度并延長色譜柱壽命，請按照孔徑依次減小的順序排列色譜柱，推薦的接法是使孔徑最大的色譜柱最靠近進樣器。原因在于：

■ 孔徑越大的色譜柱越穩(wěn)定且越能夠耐受外來物質(zhì)的積累。

■ 樣品中分子量最大的物質(zhì)對樣品的粘度影響最大。如果先分離分子量最大的物質(zhì)，那么粘度的下降速度會更快，色譜柱組的壓力將會更小。對于超高分子量的聚合物，這種分離順序有利于減小樣品的剪切效應。

色譜柱組安裝

色譜柱的安裝方法：

1. 從每根色譜柱上取下柱端塞，并將柱端塞妥善保存。

2. 將第一根色譜柱連接至進樣器出口管道。確保溶劑流向與色譜柱標簽上箭頭所示的方向一致。用手指擰緊接頭，然后用扳手將接頭再擰1/4圈。

3. 利用色譜柱隨附的U形管將下一根色譜柱連接到前一根色譜柱上。確保溶劑流向與色譜柱標簽上箭頭所示的方向一致。先用手指旋緊U形管的入口和出口接頭，然后用扳手將接頭再擰緊一圈。

4. 重復步驟3，直至連接好所有色譜柱。

5. 按照步驟1至4所述，將最后一根色譜柱連接到檢測器入口。

c.維修損壞的壓力螺釘組件

損壞的壓力螺釘或磨損的錐箍組件的卸載方法：

1. 利用截管器或帶刀刃的銼刀在所選斷點處對管件進行標記。

2. 利用覆有織物的鉗子夾住管件兩側(cè)標記處（以防損壞管件表面）。輕輕地來回彎折管件使其在標記處斷開。必須確保管件末端筆直、開口且無毛刺。

3. 依次將壓力螺釘和錐箍（錐體較大的末端朝前）套到管件上。妥善地將管件底部放入接頭座中。如果管件未完全落定，則產(chǎn)生的死體積將導致色譜結(jié)果變差。

不同類型的色譜柱，錐箍末端與U形管末端之間的距離可能不同。如果您使用的色譜柱來自另一家制造商，可能需要重置錐箍或添加新的接頭（見圖1）。進樣器與檢測器之間的所有管線均使用0.009英寸（0.25 mm）內(nèi)徑的管件。對于沃特世色譜柱而言，臨界距離為0.130英寸（2.25 mm）。

d.色譜柱組平衡

色譜柱安裝之后，或存放一段時間后重新使用時，需要對色譜柱進行平衡。平衡色譜柱組的方法：

1. 將泵流速設(shè)置為0.0 mL/min，然后打開泵。

2. 每隔15秒將流速增加0.1 mL/min，直至達到最終流速。

3. 用出廠溶劑沖洗色譜柱直至基線穩(wěn)定。

4.6 mm溶劑節(jié)約型色譜柱的流速和反壓為獲得最佳的分離度和最長的色譜柱壽命，請保證各色譜柱的流速不超過0.3 mL/min或反壓不超過3.5 MPa（500 psi，35 atm）。

請注意：色譜柱隨附的《分析證書》中標有推薦流速，但可能高于最優(yōu)值。為在實驗室中獲得最長的色譜柱壽命，請遵照我們提供的流速和反壓條件。

使用HR 0.5、HR 1和HR 2色譜柱時，須每隔30秒將流速增加0.1 mL/min，直至達到0.3mL/min。

缺損的色譜柱

若串聯(lián)色譜柱中一根或多根有缺損，則可能導致整組色譜柱存在缺陷。一根有缺損的色譜柱可能引起譜峰展寬，而這種影響是其它良好的色譜柱所無法彌補的。相關(guān)柱效測試條件請參見表4、表5或表6。

初始效率測試

在首次分析之前需要對系統(tǒng)和色譜柱進行測試。使用推薦的系統(tǒng)和色譜柱參數(shù)運行測試樣品并記錄結(jié)果。這些結(jié)果可為之后的性能測試提供比較的基準。有關(guān)測定系統(tǒng)和色譜柱效率的步驟，請參閱關(guān)于效率測試的部分。

保存這些測試得到的色譜圖。記錄柱效測試的保留時間、系統(tǒng)設(shè)置以及所有的實驗條件，以便將來進行比較時能準確重現(xiàn)。